中國(guó)葡萄屬野生種抗寒性鑒定與抗寒基因的RAPD標(biāo)記.pdf

1、　　本研究以中國(guó)葡萄屬野生種10個(gè)種38個(gè)株系、河岸葡萄2個(gè)株系、5個(gè)歐洲葡萄品種、1個(gè)歐美雜種以及2個(gè)種間雜交組合51株后代和2個(gè)自交組合54株后代共151份材料為試材，利用電導(dǎo)法、生長(zhǎng)法和離體枝條含水量的動(dòng)態(tài)變化三項(xiàng)生理指標(biāo)進(jìn)行了抗寒性鑒定，然后用隸屬函數(shù)法對(duì)上述材料進(jìn)行了抗寒性綜合評(píng)價(jià)；同時(shí)進(jìn)行了葡萄屬(Vitis)植物抗寒基因RAPD標(biāo)記的研究。主要取得了以下研究結(jié)果： 1.供試材料中的山葡萄和河岸葡萄平均隸屬度在0.7

2、以上，屬于抗寒性極強(qiáng)的類型；歐山雜種北醇和歐美雜種巨峰平均隸屬度分別為0.572和0.541，屬于抗寒性較強(qiáng)的品種。玫瑰香×黑龍江實(shí)生、紅地球×北醇兩個(gè)組合雜交后代的抗寒性表現(xiàn)基本介于雙親之間，個(gè)別出現(xiàn)超親遺傳現(xiàn)象；紅地球自交后代(平均隸屬度為0.005～0.505)和北醇自交后代(平均隸屬度為0.360～0.747)的抗寒性表現(xiàn)也出現(xiàn)分離。 2.以紅地球×北醇F1代分離群體為試材，獲得了1個(gè)與中國(guó)葡萄屬野生種抗寒基因相連鎖的R

3、APD標(biāo)記S241-691，并將該標(biāo)記在玫瑰香×黑龍江實(shí)生、紅地球×紅地球、北醇×北醇雜交后代及中國(guó)葡萄屬野生種、歐洲葡萄品種、河岸葡萄、歐美葡萄雜種.　　3.將葡萄抗寒基因RAPD標(biāo)記S241-691回收、克隆，并測(cè)序，獲得了該標(biāo)記的核苷酸序列，由691bp特定堿基組成。這為進(jìn)一步將RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為專一性更強(qiáng)的SCAR標(biāo)記或制備抗寒基因分子探針及利用染色體步移法克隆葡萄抗寒基因譜奠定了基礎(chǔ)。　　4.用Wingene231DNA分

4、析軟件對(duì)S241-691序列的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)進(jìn)行了分析，有52個(gè)可識(shí)別6個(gè)堿基及其以上序列酶切位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶在S241-691序列上存在酶切位點(diǎn)，EcoRⅠ在S241-691上沒有酶切位點(diǎn)，HindⅢ在第357和521個(gè)堿基處存在酶切位點(diǎn)。　　5.在GenBank中，對(duì)S241-691的DNA序列進(jìn)行了BLAST相似性分析和開放閱讀框架(ORF)分析。該序列與GenBank中其它生物的DNA序列同源性較小，為葡萄屬(Vitis)