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1、目的:研究異硫氰酸苯己酯(PHI)對(duì)HL-60細(xì)胞株增殖、凋亡的作用,及對(duì)HL-60細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,與經(jīng)典的PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑LY294002聯(lián)合用藥,探討PHI影響PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的可能機(jī)制。
方法:采用MTT方法繪制PHI和/或LY294002作用于HL-60細(xì)胞后的生長(zhǎng)曲線(xiàn);采用使用Annexin V/PI雙染試劑盒經(jīng)流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化;用蛋白免疫印跡法(
2、Western Blot)檢測(cè)HL-60細(xì)胞組蛋白乙?;疕3、H4水平及PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路蛋白表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:(1)PHI和LY294002都能抑制HL-60細(xì)胞增殖并能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡,隨作用時(shí)間延長(zhǎng)及濃度的增加,凋亡率逐漸上升,呈時(shí)效及量效關(guān)系,聯(lián)合用藥后變化更加明顯;(2)PHI處理HL-60細(xì)胞7小時(shí)可見(jiàn)HL-60細(xì)胞組蛋白H3、H4乙酰化升高,而LY294002處理后組蛋白乙酰化H3、H4水平
3、未見(jiàn)發(fā)生明顯改變;PHI加LY294002聯(lián)合用藥較 PHI單獨(dú)用藥組更能上調(diào)組蛋白H3、H4乙?;?。(3)PHI和LY294002均能下調(diào)HL-60細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K水平,呈時(shí)效及量效變化;聯(lián)合用藥組抑制作用更加明顯。
結(jié)論:PHI和LY294002都可抑制PI3K/Akt信號(hào)通路,抑制HL-60細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。PHI可上調(diào)組蛋白H3、H4乙?;?,LY2940
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