重組人腫瘤壞死因子受體融合蛋白(rhTNFR-FC)對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:本研究采用盲腸穿孔結(jié)扎法致大鼠膿毒癥動(dòng)物模型,觀察膿毒癥大鼠心肌損害情況,探討應(yīng)用人腫瘤壞死因子受體融合蛋白(rhTNFR:Fc)早期干預(yù)對膿毒癥心肌損害的保護(hù)作用,并初步研究其作用機(jī)理。
　　方法:清潔級SD大鼠108只,全為雌性,隨機(jī)分為3組:
　　(1)假手術(shù)組(A組,n=36),膿毒癥組(B組,n=36),膿毒癥加rhTNFR:Fc組(C組,n=36);
　　(2)A組動(dòng)物于稱重后,麻醉,后行盲腸探查術(shù)后

2、關(guān)閉腹腔,分別于術(shù)后3h,9h,24h,36h,48h和72h六時(shí)相點(diǎn)行腹主動(dòng)脈采血,采用酶聯(lián)免疫分析法檢測腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、心肌肌鈣蛋白I(cTnI)水平,留取心臟組織,采用蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)(Western blot法)作NF-κBP65蛋白檢測,在每一時(shí)相點(diǎn)取6只大鼠。
　　(3)B組動(dòng)物稱重后,麻醉,后行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)后關(guān)閉腹腔,分別于術(shù)后3h,9h,24h,36h,48h和72h六時(shí)相點(diǎn)

3、行與假手術(shù)組相同的操作步驟,采用酶聯(lián)免疫分析法檢測腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、心肌肌鈣蛋白I(cTnI)水平,留取心臟組織,作核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)P65蛋白檢測,在每一時(shí)相點(diǎn)取6只大鼠;
　　(4)C組動(dòng)物行盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)術(shù)后,立即從頸外靜脈注入益賽普(rhTNFR:Fc)水溶液2mL/kg(1g/L),分別于術(shù)后3h,9h,24h,36h,48h和72h六時(shí)相點(diǎn)行與假手術(shù)組相同的操作

4、步驟,采用酶聯(lián)免疫分析法檢測腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、心肌肌鈣蛋白I(cTnI)水平,留取心臟組織,作NF-κBP65蛋白檢測,在每一時(shí)相點(diǎn)取6只大鼠。
　　(5)所有數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析,相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。
　　結(jié)果:
　　1.血清TNF-α的變化
　　膿毒癥加rhTNFR:Fc組與膿毒癥組血清TNF-α水平在

5、CLP術(shù)后均較假手術(shù)組均增高(p<0.05),膿毒癥加rhTNFR:Fc組在3h達(dá)峰值(257.619±5.558pg/ml),隨后兩組均有下降趨勢,(p<0.05),從3h至72h膿毒癥加rhTNFR:Fc組均明顯低于膿毒癥組(p<0.05)。
　　2.血清IL-1的變化
　　與假手術(shù)組相比,膿毒癥加rhTNFR:Fc組與膿毒癥組血清IL-1水平在CLP術(shù)后均增高(p<0.05),膿毒癥加rhTNFR:Fc組在3h達(dá)峰值(

6、179.23±2.506pg/ml),隨后兩組均有下降趨勢,(p<0.05),從3h至72h膿毒癥加rhTNFR:Fc組均明顯低于膿毒癥組(p<0.05)。
　　3.血清cTnI的變化
　　與假手術(shù)組相比,膿毒癥加rhTNFR:Fc組與膿毒癥組血清cTnI水平在CLP術(shù)后均增高(p<0.05),膿毒癥加rhTNFR:Fc組在3h達(dá)峰值(228.332±3.635pg/ml),隨后兩組均有下降趨勢(p<0.05),從3h至72

7、h均明顯低于膿毒癥組(p<0.05)。
　　4.(NF-κB)P65蛋白水平表達(dá)情況
　　膿毒癥加rhTNFR:Fc組與膿毒癥組CLP術(shù)后3h(NF-κB)P65蛋白水平均高于假手術(shù)組(p<0.05),隨后均有下降趨勢,膿毒癥加rhTNFR:Fc組下降幅度較膿毒癥組更快,在24h,36h,48h膿毒癥加rhTNFR:Fc組(NF-κB)P65蛋白水平均低于膿毒癥組,至72h兩組無明顯差異。
　　5.cTnI與TNF-α

8、、IL-1之間的相關(guān)性分析
　　TNF-α與cTnI具有顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.393,P=0.164;IL-1與cTnI具有顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.980,P=0.000。
　　結(jié)論:
　　1.在膿毒癥致急性心肌損傷的過程中,膿毒癥大鼠血清cTnI早期升高,反映了膿毒癥有心肌損傷,通過檢測血清cTnI水平,可以反映急性心肌損傷的嚴(yán)重程度。
　　2.膿毒癥發(fā)生發(fā)展過程中,膿毒癥大鼠血清TNF-α、IL-1升高

9、,與cTnI具有高度相關(guān)性,表明炎癥因子過度表達(dá)參與了膿毒癥心肌損傷,(NF-κB)P65蛋白表達(dá)增強(qiáng),推測膿毒癥可能通過NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路致細(xì)胞因子過度表達(dá),從而參與膿毒癥的心肌損傷的過程。
　　3.膿毒癥大鼠早期應(yīng)用rhTNFR:Fc干預(yù)后,cTnI下降,心肌損傷減輕,TNF-α、IL-1炎癥因子水平下降,(NF-κB)P65蛋白表達(dá)下調(diào),說明rhTNFR:Fc通過抑制TNF-α介導(dǎo)NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷細(xì)胞因子過度表達(dá),