膝前交叉韌帶重塑部位及其分子機制初探.pdf

1、目的：
　　本文研究前交叉韌帶不同分束在前交叉韌帶損傷修復中的作用，探討是否前交叉韌帶的前內側在前交叉韌帶中較后外側束作用更大。
　　方法：
　　隨機抽取本院2010年6月至2012年10月具有術前MRI資料并進行膝關節(jié)鏡探查的病例進行回顧性分析，通過膝關節(jié)MRI矢狀位及斜矢狀位雙維掃描，檢測前交叉韌帶前內側束、后外側束的長度、厚度、寬度及脛骨止點之前和脛骨止點之后的長度。在無菌環(huán)境下，從10具自愿捐贈的新鮮尸體上取膝

2、關節(jié)，并取出膝關節(jié)交叉前韌帶，根據ACL的解剖形態(tài)學特點和膝關節(jié)不同伸屈角度下的緊張狀態(tài)，將ACL分成前內側束和后外側束兩個功能纖維束，束間被疏松結締組織和血管分離。通過生物動力學測試了前交叉韌帶不同部位的結構和力學特點，在肌腱恢復后行拉斷試驗，記錄負荷-延長曲線，并根據此前測得的初長度及橫截面積按以下公式計算最大應變和最大應力；提取總RNA，并反轉錄成
　　cDNA后，應用實時定量PCR檢測前內側束和后外側束中與肌腱修復相關的常

3、見MMPs基因；再通過將ACL的前內側束和后外側束兩個功能纖維束，經固定、石蠟包埋，利用MMP-2和MMP-3的多克隆抗體為一抗，進行免疫組化實驗；將前內側束和后外側束兩個功能纖維束中的組織分別收集，勻漿后提取總蛋白，用Western blotting分析不同分束中MMP-2、MMP-3的表達量，將WB條帶進行灰度掃描，灰度和條帶面積的乘積即為各蛋白相對表達水平。檢測了MMPs在前交叉韌帶不同部位中的表達水平。
　　結果：

4、　　1.通過影像學和生物動力學測試了前交叉韌帶不同部位的結構和力學特點；前內束的最大應力和最大應變比后外束的大，進一步說明前交叉韌帶的脛骨止點的前部具有成為臨床肌腱重建最佳部位的潛力，為今后的臨床應用提供理論基礎。
　　2.用RT-PCR、免疫組化、western-blot檢測了MMPs在前交叉韌帶不同部位中的表達水平，結果表明MMP-2在前內束表達較高，在后外側束的表達較低；MMP-3在前內側束表達較低，在后外側束的表達較高，進