紅三葉異黃酮合成酶基因TpIFS的單倍型變異分析及異黃酮近紅外測(cè)定模型的建立與利用.pdf

1、紅三葉因富含具有一系列保健價(jià)值的異黃酮類化合物而備受關(guān)注。然而異黃酮合成酶的有無及活性大小則直接影響紅三葉能否合成異黃酮類物質(zhì)以及合成能力的大小。本文通過對(duì)來自歐洲、亞洲、美洲及大洋洲的不同類型的紅三葉材料的異黃酮合成酶基因TpIFS的遺傳多樣性及單倍型多樣性進(jìn)行分析，為后續(xù)基于候選基因TpIFS的關(guān)聯(lián)分析提供基礎(chǔ)；并采用高效液相色譜結(jié)合傅里葉近紅外光譜技術(shù)，輔之以化學(xué)計(jì)量法建立了紅三葉異黃酮含量測(cè)定的近紅外模型，為后續(xù)紅三葉種質(zhì)材料異

2、黃酮含量的大批量快速測(cè)定奠定了技術(shù)基礎(chǔ)?，F(xiàn)得到如下結(jié)果：
　　1、采用流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合染色體計(jì)數(shù)鑒定了108份候選材料的倍性，鑒定出10份四倍體材料，98份二倍體材料。挑選出的二倍體材料供后續(xù)單倍型分析。
　　2、通過直接測(cè)序，獲得了98份材料414個(gè)單株的長(zhǎng)為1842bp的TpIFS基因序列，其中包括部分20bp的5’UTR，900bp的外顯子1，123bp的內(nèi)含子，675bp的外顯子2和124bp的3’ UTR。序列分析結(jié)

3、果顯示，共包含140個(gè) SNP位點(diǎn)和23個(gè)插入缺失突變位點(diǎn)，核苷酸多樣性指數(shù)π=0.00524。其中編碼區(qū)85個(gè)SNP位點(diǎn)，14個(gè)插入缺失位點(diǎn)，非編碼區(qū)55個(gè)SNP位點(diǎn)，9個(gè)插入缺失突變位點(diǎn)。此外，在140個(gè)SNP中發(fā)現(xiàn)29個(gè)位點(diǎn)存在一定頻率的雜合子且多以T/C雜合形式存在。
　　3、414個(gè)單株共分為350個(gè)單倍型，單倍型多樣性指數(shù)為0.9982。通過對(duì)5個(gè)主要變異位點(diǎn)進(jìn)行單倍型劃分，414個(gè)單株共劃分為36種單倍型，且大部分單

4、倍型為不同來源或不同類型材料共有，沒有明顯的地理界限或材料特性。
　　4、建立了紅三葉10種異黃酮組分及總異黃酮含量的近紅外測(cè)定模型。運(yùn)用總異黃酮近紅外模型測(cè)定了286個(gè)單株的總異黃酮含量，平均為9.18mg/g。按照不同地理來源分，美洲種質(zhì)材料的總異黃酮含量高于亞洲，歐洲材料的異黃酮含量最低，但差異都不顯著；按照不同材料類型分，不同類型間總異黃酮含量差異不顯著。
　　5、結(jié)合單倍型數(shù)據(jù)和異黃酮含量數(shù)據(jù)，表明 TpIFS并未