活性維生素D通過調(diào)節(jié)DN大鼠巨噬細胞M1-M2活化表型防治足細胞損傷.pdf

1、目的：巨噬細胞的激活是糖尿病腎病(DN)早期足細胞損傷的中心環(huán)節(jié)。研究表明，巨噬細胞活化狀態(tài)和功能的兩面性決定腎臟疾病的不同轉(zhuǎn)歸。巨噬細胞經(jīng)典M1型活化介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，參與組織損傷;替代途徑M2型活化具有組織修復(fù)作用。因此，找到調(diào)節(jié)巨噬細胞活化狀態(tài)和功能的方法是早期防治DN足細胞損傷的關(guān)鍵。近期臨床研究發(fā)現(xiàn)，活性維生素D(VD)對DN具有顯著的腎保護作用，但其機制尚未闡明。本研究通過建立STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠模型，探討活性維生素D能否

2、通過調(diào)節(jié)M1/M2巨噬細胞表型活化從而發(fā)揮DN足細胞保護作用。
　　方法:將SD雄性大鼠隨機分為四組:對照組一(NC-1組)、對照組二(NC-2組，對照+VD干預(yù)組)、DN組、DN+VD干預(yù)組(VD組，骨化三醇0.1μg·kg-1·d-1灌胃)，定期檢測血糖、體質(zhì)量，收集尿標本，分別于干預(yù)后8w、14w、18w末處死動物，檢測Scr、BUN和24小時尿蛋白變化;PAS染色觀察腎臟病理改變;免疫組化法檢測腎組織CD68+巨噬細胞浸潤

3、數(shù)量;Western Blot檢測nephrin、podocin、CD68以及M1巨噬細胞特異性標志物iNOS、TNF-α和M2巨噬細胞特異性標志物CD163、Arg-1、MR表達。
　　結(jié)果:(1)與兩對照組相比，DN組Scr、BUN、24小時尿蛋白及腎小球系膜基質(zhì)增生程度顯著增加，podocin、nephrin蛋白表達下降（均P＜0.05）。VD干預(yù)后能明顯改善上述病理現(xiàn)象（均P＜0.05）。(2)與兩對照組相比，DN組腎組織

4、CD68+巨噬細胞浸潤數(shù)量明顯增加，呈時間依賴性。VD干預(yù)后能顯著減少CD68+巨噬細胞浸潤數(shù)量(P＜0.05)。(3)進一步確定腎組織巨噬細胞M1/M2活化表型發(fā)現(xiàn)，8w、14w、18w末DN組iNOS、TNF-α蛋白表達較兩對照組顯著升高（均P＜0.05），VD干預(yù)后能明顯抑制同期DN腎組織iNOS、TNF-α表達（均P＜0.05）;8w、14w末VD組CD163、Arg-1、MR蛋白表達與DN組相比無顯著差異（均P＞0.05），1

5、8w末VD組CD163、Arg-1、MR蛋白表達較DN組顯著升高（均P＜0.05），CD163/CD68蛋白表達比例顯著增加(P＜0.05)。(4)相關(guān)分析顯示，M1標志物iNOS與nephrin、podocin蛋白表達均呈負相關(guān)(r=-0.707，P＜0.01;r=-0.712，P＜0.01);M2標志物CD163與nephrin、podocin蛋白表達均呈正相關(guān)(r=0.627, P＜0.01;r=0.613, P＜0.01)。