染色體微陣列分析技術(shù)在頸項(xiàng)透明層增厚胎兒病例中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　1、探討全基因組高分辨率染色體微陣列分析技術(shù)（Chromosomal Microarray Analysis，CMA)在染色體核型正常的頸項(xiàng)透明層（nuchal translucency，NT）增厚胎兒病例中的應(yīng)用價(jià)值。
　　2、探討胎兒早孕期 NT增厚與結(jié)構(gòu)畸形之間的相關(guān)性。
　　3、探討 CMA技術(shù)在單純性 NT增厚胎兒病例與 NT增厚合并其它結(jié)構(gòu)異常胎兒病例中致病性拷貝數(shù)變異（copy number

2、variants，CNVs）檢出的差異性。
　　4、探討 NT增厚程度與致病性 CNVs之間的關(guān)聯(lián)性。
　　5、探討早孕期 NT增厚胎兒病例的臨床產(chǎn)前診斷技術(shù)流程。
　　方法：
　　1、研究對(duì)象：本研究為回顧性研究，選取2012年1月至2013年1月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心產(chǎn)前診斷中心門診行早孕期（11+0—13+6周）唐氏一站式篩查提示胎兒 NT≥3.5mm或3.0mm≤NT＜3.5mm且唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)（切割值

3、為1:270）的孕婦行侵入性產(chǎn)前診斷后的胎兒樣本（均為單胎）。
　　2、全部胎兒病例事先均行常規(guī) G顯帶染色體核型分析，核型結(jié)果正常者進(jìn)一步行 CMA檢測(cè)。
　　3、使用Qiagen DNA提取試劑盒提取胎兒樣本（絨毛或羊水）的基因組 DNA并使用NanoDrop分光光度計(jì)對(duì) DNA的濃度和純度進(jìn)行測(cè)量。
　　4、根據(jù)美國(guó) Affymetrix公司 CytoScan HD芯片平臺(tái)(包含195萬(wàn)拷貝數(shù)探針和75萬(wàn)單核苷酸

4、多態(tài)性探針)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作流程對(duì)樣本 DNA進(jìn)行處理。
　　5、使用配套的 CHAS軟件對(duì)芯片掃描后的文件進(jìn)行信息轉(zhuǎn)換和數(shù)據(jù)分析。
　　6、參照本實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部數(shù)據(jù)庫(kù)、相關(guān)國(guó)際公共數(shù)據(jù)庫(kù)、同行實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)庫(kù)以及結(jié)合家系綜合分析等手段對(duì) CMA檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，判斷 CNVs的性質(zhì)。
　　7、通過(guò)醫(yī)院內(nèi)部臨床信息登記系統(tǒng)及電話隨訪的方式，追蹤了解胎兒中孕期結(jié)構(gòu)篩查結(jié)果、妊娠結(jié)局及出生后精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育情況等臨床資料。

5、　　8、采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件 SPSS13.0中的χ2檢驗(yàn)比較單純性 NT增厚病例組與 NT增厚合并其他結(jié)構(gòu)畸形病例組的致病性檢出率的差異性，定義 P＜0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；采用非參數(shù) t檢驗(yàn)比較檢出致病性 CNVs病例組與未檢出致病性 CNVs病例組的 NT值均數(shù)的差異性，定義 P＜0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、一共有149例胎兒的 NT厚度≥3mm，NT值大小范圍為3.0—8.1mm。其中97例因

6、 NT≥3.5mm或 NT介于3.0-3.5mm之間但唐氏高風(fēng)險(xiǎn)而行侵入性產(chǎn)前診斷，其他52例胎兒因唐氏低風(fēng)險(xiǎn)而未行侵入性產(chǎn)前診斷。
　　2、97例胎兒病例中，19例胎兒有染色體異常，染色體異常的發(fā)生率為19.6％（19/97），其中染色體數(shù)目異常占84.2%(16/19)，染色體結(jié)構(gòu)異常占15.8%(3/19)；其他78例胎兒染色體核型正常。
　　3、78例染色體核型正常胎兒中，11例胎兒在中孕期超聲檢查提示發(fā)生結(jié)構(gòu)異常，

7、結(jié)構(gòu)異常發(fā)生率為14.1%（其中3例多發(fā)畸形，3例心臟畸形，2例唇腭裂，1例腦積水，1例巨大膀胱，1例腹壁囊腫）；其余67例(85.9%)中孕期超聲結(jié)構(gòu)篩查未發(fā)現(xiàn)異常。
　　4、78例染色體核型正常胎兒中，8例胎兒因中孕期結(jié)構(gòu)異常而終止妊娠，1例胎死宮內(nèi)（原因未知），其余69例胎兒均活產(chǎn)。69例活產(chǎn)兒中，7例因電話失聯(lián)而沒(méi)有獲得隨訪信息；62例成功獲得臨床資料，隨訪成功率為89.9%。5、成功隨訪的62例胎兒病例中，隨訪時(shí)間范圍為

8、出生后1天—15個(gè)月。其中3例出生后有先天性結(jié)構(gòu)異常（與中孕期超聲診斷一致，2例唇腭裂，1例腹壁囊腫）；3例有不同程度精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲緩；1例有自閉癥；1例出生后24小時(shí)死亡(極低出生體重兒，急性呼吸窘迫綜合征)；其余54例未發(fā)現(xiàn)異常。
　　6、 CMA在78例胎兒樣本中均檢測(cè)到 CNVs，CNVs的檢出率為100%（78/78）。其中在6例胎兒中檢出明確致病性 CNVs，致病性 CNVs的檢出率為7.7%。在2例（2.6%）胎兒中

9、檢出臨床意義不明確 CNVs（variants of unknown significance,VOUS），在70例（89.7%）胎兒中檢出良性 CNVs。
　　7、在6例檢出明確致病性 CNVs的胎兒病例中，5例只檢出一種致病性 CNVs，分別為5p13.2微重復(fù)（0.52Mb）、22q11.21微缺失（3.17Mb）、7p15.3微重復(fù)（0.41Mb）、20p12.1微缺失（0.46Mb）和16p13.3微缺失（1.56Mb）

10、；其余1例中檢出2種致病性 CNVs，分別為4p16.3微缺失（3.05Mb）和11p15.4-p15.5微重復(fù)（3.18Mb）。
　　8、 CMA起初在5例胎兒中檢出 VOUS，通過(guò)進(jìn)一步對(duì)其父母樣本行 CMA檢測(cè)，結(jié)果顯示3例胎兒 VOUS是遺傳自表型正常的父母之一，因此判定為良性CNVs；其余2例為新發(fā)，為真正的 VOUS，分別為8q21.11-q21.12微重復(fù)（1.07Mb）、5q12.1微缺失（0.23Mb）。因此，真

11、正 VOUS檢出率為2.6%（2/78）。
　　9、 CMA在70例(89.7%)胎兒中檢出良性 CNVs，其中最常見(jiàn)的良性 CNVs有5種（P≥5%，P值=檢出某 CNVs的片段數(shù)量占本研究中檢出的良性 CNVs總量的百分比），分別為14q32.33微重復(fù)（18.1%）、8p11.2微缺失/微重復(fù)（9.7%）、22q11.22微重復(fù)（8.9%）、4q13.2微缺失/微重復(fù)（7.8%）、16p11.2微缺失/微重復(fù)（5.6%）。3

12、例胎兒檢出的 CNVs遺傳自表型正常的父母之一，因此考慮為良性。3例胎兒中均檢出10p12.33微缺失（0.12Mb），該片段在 DGV及DECIPHER等國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)中未見(jiàn)報(bào)道，但其內(nèi)不含任何 OMIM基因，因此考慮其為良性。
　　10、單純性 NT增厚胎兒病例組與 NT增厚合并其他結(jié)構(gòu)異常胎兒病例組致病性 CNVs的檢出率分別為6.0%(4/67)和18.2%(2/11)（P=0.198，F(xiàn)isher’s檢驗(yàn)），兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差

13、異。檢出致病性 CNVs胎兒病例組與未檢出致病性CNVs胎兒病例組 NT值的平均數(shù)分別是4.5mm和4.2mm（P=0.735，Mann-Whitney檢驗(yàn))，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1、染色體異常是導(dǎo)致胎兒早孕期 NT增厚的常見(jiàn)遺傳學(xué)原因。
　　2、 CMA技術(shù)在染色體核型正常的 NT增厚胎兒中具有重要應(yīng)用價(jià)值，可將致病性 CNVs的檢出率額外提高7.7%。
　　3、早孕期 NT增厚的胎兒病例發(fā)生