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文檔簡介
1、目的:
1.研究SRp20蛋白在胰腺癌細胞的表達情況;
2.研究雷公藤甲素(Triptolid,簡稱TPL)誘導(dǎo)人胰腺癌細胞凋亡作用與SRp20蛋白的相關(guān)性;
3.探討SRp20蛋白與雷公藤甲素誘導(dǎo)胰腺細胞凋亡p53相關(guān)途徑的機制。
方法:
1.取含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)胰腺癌細胞株HPDE6-C7、AsPC-1、PANC-1和Bxpc-3,傳代至10-20代的對數(shù)期細胞
2、進行實驗;
2.采用MTT法與Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術(shù)檢測TPL對AsPC-1胰腺癌細胞增殖抑制及凋亡的影響;
3.應(yīng)用Western blot檢測:
①HPDE6-C7、AsPC-1、BxPC-3和PANC-1細胞內(nèi)SRp20蛋白的表達水平并應(yīng)用相對定量法分析各細胞組SRp20的表達性差異;
?、贏sPC-1細胞胞內(nèi)SRp20、p53、p53β和Bax蛋白的表達水平,并應(yīng)用
3、相對定量法分析比較不同實驗處理組SRp20、p53、p53β和Bax蛋白的表達差異。
結(jié)果:
1.細胞形態(tài)學觀察經(jīng)TPL處理的AsPC-1細胞,加藥12.5、25、50nM/LTPL處理48h組比較無處理對照組,細胞密度明顯減少,出現(xiàn)不同程度凋亡,細胞形態(tài)不一,胞內(nèi)腫脹,出現(xiàn)空泡樣變;
2.MTT結(jié)果顯示使用TPL經(jīng)不同作用時間和濃度處理的AsPC-1細胞,比較無處理對照組細胞均出現(xiàn)明顯的增值抑制,其中加藥
4、24h、48h、72h各濃度組細胞均受不同程度抑制,呈時間依賴效應(yīng),各時間組在12.5、25、50 nM/L范圍,抑制率與加藥劑量呈明顯正相關(guān)效應(yīng),其中24h各加藥劑量組的生長抑制率分別為25.28±2.18%(12.5nM/L)、36.01±1.82%(25 nM/L)、60.03±1.67(50 nM/L)[實驗組與對照組間,p<0.01];
3.FCM Annexin V-FITC、PI雙染法凋亡檢測顯示,經(jīng)不同濃度TP
5、L處理AsPC-1細胞48h,加藥12.5、25、50組凋亡比例分別為9.45±1.92、30.1±2.57%、44.23±4.36%(實驗組與對照組間,p<0.01),隨著TPL加藥劑量的增加凋亡比例亦明顯增加;
4.Westernblot印跡實驗結(jié)果顯示:
?、傧噍^于人胰腺導(dǎo)管上皮細胞系HPDE6-C7,人胰腺癌細胞系A(chǔ)sPC-1,BxPC-3、PANG-1的SRp20蛋白表達明顯上調(diào)(實驗組與對照組間p<0.01
6、);
?、谙噍^于無處理對照組,SRP20蛋白在TPL誘導(dǎo)胰腺癌細胞AsPC-1凋亡中的表達水平明顯下調(diào),而p53、p53β和Bax蛋白的表達水平均呈明顯上調(diào)趨勢,且SRP20的表達濃度在一定的加藥劑量范圍內(nèi)(TPL6.25~50nmol/L)存在量效與時間依賴性(實驗組與對照組間,p<0.01),而p53、P53β和Bax蛋白的表達濃度則在一定的劑量范圍內(nèi)內(nèi)(TPL6.25~50nmol/L)存在量效依賴性(實驗組與對照組間,p
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