小檗胺對(duì)肝癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:研究小檗胺對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖及凋亡作用，探索其可能機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:經(jīng)不同濃度的小檗胺處理體外培養(yǎng)的肝癌SMMC-7721細(xì)胞，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖的變化;采用相差拍照法檢測細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;采用PI染色法檢測腫瘤細(xì)胞周期分布的變化;采用RT-PCR和western-blot法檢測腫瘤細(xì)胞中cyclin B1、cyclin D1、p21和p27的表達(dá)水平;采用Annexin/PI

2、和DAPI染色法檢測腫瘤細(xì)胞凋亡水平的變化;采用細(xì)胞免疫熒光法檢測細(xì)胞色素C的變化;采用RT-PCR和western-blot法檢測腫瘤細(xì)胞中bax、bcl-2、p53和survivin的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與對(duì)照組比較，不同濃度的小檗胺均可明顯抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖。PI染色結(jié)果顯示，小檗胺可有效誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期(P＜0.05，P＜0.01)。RT-PCR和western-blot結(jié)果均顯示，應(yīng)

3、用小檗胺處理腫瘤細(xì)胞后，p21和p27的表達(dá)明顯升高，而cyclin B1和cyclin D1的表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05，P＜0.01)。此外，與對(duì)照組比較，不同濃度的小檗胺均可明顯誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡，并且促使細(xì)胞色素C從細(xì)胞核轉(zhuǎn)位到胞漿。RT-PCR和western-blot結(jié)果均顯示，應(yīng)用10-40μ M小檗胺處理腫瘤細(xì)胞后，bax和p53的表達(dá)明顯升高，而bcl-2和survivin的表達(dá)水平明顯下降，bcl-2/bax比例

4、顯著降低，且隨著藥物濃度的增加其作用更為明顯(P＜0.05，P＜0.01)。
　　結(jié)論:小檗胺能明顯地抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。一方面，小檗胺能抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖，并使其細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，其機(jī)制可能與其上調(diào)p21和p27的表達(dá)和下調(diào)cyclin B1和Cyclin D1的表達(dá)有關(guān)。另一方面，小檗胺能誘導(dǎo)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與上調(diào)bax和p53、下調(diào)bcl