大鼠Nor-1在大腸桿菌中的高效表達(dá)、抗體制備與功能研究.pdf

1、為探索Nor-1在神經(jīng)元中的功能及作用機(jī)制,我們首先必須明確其在神經(jīng)元損傷過(guò)程中蛋白表達(dá)的情況,因此作為工具抗NOR-1抗體的制備是必須的.為此,我們運(yùn)用原核基因融合表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)Nor-1的部分蛋白,以此作為抗原制備抗NOR-1多克隆抗體;使用這種抗體檢測(cè)Nor-1在小腦顆粒神經(jīng)元低鉀誘導(dǎo)的凋亡模型及缺氧模型中蛋白的表達(dá)情況,并在模型中給予forskolin、MK801和海洋甾體YC-1這些神經(jīng)元保護(hù)藥物,觀察Nor-1的表達(dá)與神經(jīng)保護(hù)

2、及與神經(jīng)元存活的關(guān)系.我們發(fā)現(xiàn),這些藥物在神經(jīng)元損傷模型中促神經(jīng)元存活的同時(shí),誘導(dǎo)Nor-1蛋白的表達(dá)上調(diào),提示Nor-1可能參與這些藥物促神經(jīng)元存活作用的信號(hào)轉(zhuǎn)遞.這些藥物的神經(jīng)元保護(hù)作用機(jī)制的研究已經(jīng)較為深入,而我們的實(shí)驗(yàn)為這些藥物的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制的研究提供了新的線索和思路.抗NOR-1多克隆抗體的獲得為Nor-1的生物學(xué)功能研究奠定了良好的基礎(chǔ).作為新的促神經(jīng)元存活的基因,明確Nor-1在小腦顆粒神經(jīng)元損傷模型中蛋白表達(dá)的情況為探索

3、新的神經(jīng)元保護(hù)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路打下基礎(chǔ).第一章大鼠Nor-1在大腸桿菌中高效表達(dá)及其抗體的制備選取Nor-1中能表達(dá)較好特異性及免疫原性蛋白的一段基因,構(gòu)建其原核表達(dá)系統(tǒng),在大腸桿菌中高效表達(dá)GST-NOR-1融合蛋白并以此制備抗NOR-1的特異性抗體.第二章Nor-1在小腦顆粒神經(jīng)元損傷模型中表達(dá)的研究利用制備的抗NOR-1多克隆抗體探討Nor-1在低鉀誘導(dǎo)小腦顆粒神經(jīng)元凋亡模型及小腦顆粒神經(jīng)元缺氧模型中的表達(dá)情況,分別加入forskol