抑制性差減雜交結(jié)合cDNA芯片篩選家兔高脂血癥及動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因.pdf

1、　　本研究為了探尋與AS發(fā)生發(fā)展相關(guān)的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝、糖代謝、炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、變態(tài)反應(yīng)等的肝臟差異表達(dá)基因，明確肝臟在高脂血癥和AS發(fā)生中的作用。方法：通過給新西蘭白兔喂飼高膽固醇飲食復(fù)制高脂血癥-As動(dòng)物模型。根據(jù)其血清膽固醇含量分為敏感組和不敏感組。分別取兩組動(dòng)物的肝臟，抽提總RNA，并分離mRNA，以造型敏感組為受檢者(tester)、造型不敏感組為驅(qū)動(dòng)者(driver)，進(jìn)行正向SSH；在反向SSH中則相反。經(jīng)兩輪

2、雜交及兩次抑制性PCR，將產(chǎn)物與T/A載體連接構(gòu)建cDNA差減文庫，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行文庫擴(kuò)增。　　研究應(yīng)用Western印跡觀察敏感組和不敏感組差異基因熱休克蛋白70(HSP70)的蛋白表達(dá)情況。應(yīng)用原位雜交技術(shù)鑒定HSP70在造型動(dòng)物肝臟的細(xì)胞定位。ELISA檢測(cè)血清HSP70表達(dá)。運(yùn)用Western印跡分析用LDL、ox-LDL刺激后HepG2細(xì)胞HSP70表達(dá)量是否改變?！　⊙芯繎?yīng)用SSH和cDNA芯片分離到52條家兔肝臟高