cRGD修飾的Mpeg-plga-pll靶向納米藥物遞送系統(tǒng)對(duì)乳腺癌的治療研究.pdf

1、近年來，靶向抗腫瘤治療模式逐漸成為臨床“新寵”，在提高療效的同時(shí)，可以大幅度減低患者發(fā)生副作用的風(fēng)險(xiǎn)。因此在科學(xué)家探索癌癥治療的各種策略中，腫瘤靶向治療是腫瘤治療中最有前景的方案。靶向治療領(lǐng)域中關(guān)于載體的研究始終是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。尋找對(duì)腫瘤細(xì)胞有特異性的載體構(gòu)建靶向遞送系統(tǒng)，將藥物遞送到腫瘤部位，使腫瘤局部藥物濃度增加，達(dá)到選擇性殺滅的目的。
　　 本論文中設(shè)計(jì)合成了纈氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-谷氨酸環(huán)肽(VRGDG，cR

2、GD)修飾的單甲醚-聚乙二醇-聚（丙交酯-乙交酯）-聚賴氨酸(mPEG-PLGA-PLL)聚合物材料(mPEG-PLGA-PLL-cRGD)。以合成的聚合物材料為載體構(gòu)建靶向納米遞送系統(tǒng)。并對(duì)構(gòu)建的靶向納米遞送系統(tǒng)的生物相容性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)，觀察了靶向納米遞送系統(tǒng)的腫瘤靶向性，研究了其對(duì)乳腺癌動(dòng)物模型的治療效果。
　　 本論文的主要研究結(jié)果如下:
　　 設(shè)計(jì)并合成了聚合物材料mPEG-PLGA-PLL-cRGD，用紅外光

3、譜、核磁共振等測(cè)試手段對(duì)合成的產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。以合成的聚合物材料為載體，以DHAQ為模型藥，用乳化-溶劑蒸發(fā)法制備出載體材料的空白納米粒（mPEG-PLGA-PLL和mPEG-PLGA-PLL-cRGDNPs）和載DHAQ的納米粒（DHAQ-mPEG-PLGA-PLL和DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGDNPs）。對(duì)納米粒的制備工藝進(jìn)行了研究，其工藝的優(yōu)化條件是:材料濃度為20mg/mL，乳化劑F68濃度為0.5％，超聲強(qiáng)

4、度為400W，內(nèi)水相/外水相的體積比為1∶10。制備的納米粒大小均勻，粒徑在180nm左右，包封率為85.3％。
　　 通過MTT法測(cè)試了空白納米粒和載DHAQ的納米粒細(xì)胞的毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白納米粒對(duì)MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞存活率的影響較小，表明材料幾乎無細(xì)胞毒性。載DHAQ納米?？梢杂行Ы档蚆DA-MB-231乳腺癌細(xì)胞存活率。通過溶血率法測(cè)試了空白納米粒的溶血率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白納米粒的溶血率＜5％，符合材料溶

5、血率的要求。表明納米粒具有良好的生物相容性。
　　 通過激光共聚焦顯微鏡觀察了MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞攝取納米粒的分布。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，被攝入到細(xì)胞中的納米粒主要分布在細(xì)胞漿中，少量的分布在細(xì)胞核中。
　　 通過細(xì)胞攝取納米粒定量分析實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)了納米粒所遞送到MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中的藥物濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與DHAQ-mPEG-PLGA-PLL納米粒相比，DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD納米粒

6、能更有效被細(xì)胞攝取，從而導(dǎo)致其遞送到細(xì)胞中的藥物濃度顯著增高。
　　 將羅丹明B(Rb)作為熒光探針包裹納米粒中來研究細(xì)胞攝取納米粒的通路。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與Rb-mPEG-PLGA-PLL納米粒相比，Rb-mPEG-PLGA-PLL-cRGD納米粒能更高效地與MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞結(jié)合。Rb-mPEG-PLGA-PLL-cRGD納米粒主要是通過納米粒上cRGD與細(xì)胞表面的整合素αvβ3的結(jié)合來靶向細(xì)胞，之后再通過細(xì)胞質(zhì)微

7、囊介導(dǎo)的內(nèi)吞被攝入到細(xì)胞內(nèi)。Rb-mPEG-PLGA-PLL納米粒則是直接通過細(xì)胞質(zhì)微囊介導(dǎo)的內(nèi)吞和細(xì)胞胞飲被攝入到細(xì)胞內(nèi)。通過活體靶向熒光成像技術(shù)，觀察了熒光納米粒在尾靜脈注射后的2、12、24和48h時(shí)對(duì)腫瘤組織的靶向效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與Rb-mPEG-PLGA-PLL納米粒相比，Rb-mPEG-PLGA-PLL-cRGD納米粒在體內(nèi)具有更理想的循環(huán)時(shí)間和靶向效果。通過高效液相色譜儀來分析檢測(cè)了載藥納米粒在尾靜脈注射后的2、12、

8、24和48h時(shí)的體內(nèi)藥物分布。通過對(duì)體內(nèi)藥物濃度的精確測(cè)量，用來進(jìn)一步量化、驗(yàn)證活體靶向熒光成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與DHAQ-mPEG-PLGA-PLL納米粒相比，mPEG-PLGA-PLL-cRGD納米粒能有效提高荷MDA-MB-231乳腺癌小鼠腫瘤中的藥物濃度。表明DHAQ-mPEG-PLGA-PLL-cRGD納米粒靶向腫瘤的效果較好。
　　 對(duì)荷MDA-MB-231乳腺癌小鼠進(jìn)行為期36天的治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DHAQ