促紅細胞生成素對6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的帕金森病體外模型多巴胺能神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、帕金森病(Parkinson's diease PD)是一種常見中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，Braak將PD病理分為6級，認為PD病變始于延髓逐漸依次進展到橋腦、中腦、最后到間腦和新皮層，經(jīng)過了六個不同的神經(jīng)病理階段。PD的發(fā)病率隨著年齡增長不斷增高，PD的發(fā)病率呈明顯的上升趨勢。我國的PD患病率在30～60歲為500/10萬，60歲以上為1000/10萬，男／女為2～3：1，在55歲以上的人群中，帕金森病患病率為1.07％，年齡越大患病率越

2、高，75歲以上的人群PD患病率達到2.5％以上。這些數(shù)據(jù)均與歐美國家歐洲2005年報道人群患病率接近，并且遠遠高于上個世紀80年代我國的調(diào)查結(jié)果。PD嚴重地影響著老年人的生活質(zhì)量。目前還未發(fā)現(xiàn)一種有效的方法或藥物能徹底治愈PD患者。促紅細胞生成素(erythropoietin， EPO)是一種糖蛋白激素，其參與調(diào)節(jié)紅細胞前體細胞的分化、增殖、抑制細胞凋亡。體外EPO的實驗研究發(fā)現(xiàn)，EPO能減輕腦和脊髓的缺血和外傷、蛛網(wǎng)膜下腔出血、癲癇持

3、續(xù)狀態(tài)和實驗性自身免疫性腦脊髓炎等所致的神經(jīng)元損害，這些研究顯示EPO具有神經(jīng)保護作用。目前研究多限于EPO對急性腦損傷尤其是缺血腦損傷的保護作用，很少有實驗研究和臨床證據(jù)直接證實EPO在PD等神經(jīng)系統(tǒng)慢性變性疾病神經(jīng)保護中的作用。本實驗利用6- OHDA制作PD體外細胞模型，觀察EPO對6-羥基多巴胺(6-OHDA)所致的PD模型中多巴胺能神經(jīng)元的影響。
　　 目的:
　　 探討促紅細胞生成素對6-羥基多巴胺誘導(dǎo)的SD

4、大鼠帕金森病體外模型的多巴胺能神經(jīng)元保護作用及其機制。
　　 方法:
　　 取孕13～14天SD大鼠中腦原代細胞進行培養(yǎng)。試驗分4組：(1)對照組：原代培養(yǎng)細胞；(2)6-OHDA組：原代培養(yǎng)細胞+6-OHDA;(3)6-OHDA+EPO組：不同濃度EPO(0.1U/ml、1U/ml、3U/ml、10U/ml及20U/ml)分為A、B、C、D、F5個亞組。(4)6-OHDA+EPO+AG490組：10U/mlE PO+1

5、0 U/ml AG490為E組。培養(yǎng)至第6天加入不同濃度EPO，第10天A、B、C、D、F組加6-OHDA(100μmol/L)，同時E組中加AG490作用1小時，收集細胞。通過流式細胞儀，用羅丹明123（Rh123）檢測線粒體膜電位(ΔΨm)；免疫組化鑒定酪氨酸羥化酶(TH)、caspase-3的表達。
　　 結(jié)果:
　　 與6-OHDA比較，B、C、D、F組TH陽性細胞數(shù)明顯增加（P＜0.01或0.05），B、C、D

6、、E、F組caspase-3陽性細胞數(shù)明顯減少(P＜0.01);A、B、C、E、F組與D組比較，D組TH陽性細胞數(shù)明顯增多，而caspase-3陽性細胞數(shù)明顯減少(P＜0.01或0.05)；與E組(加AG490)比較，C、D、F組TH陽性細胞數(shù)明顯增多，B、C、D、F組caspase-3陽性細胞數(shù)明顯減少（P＜0.01或0.05）。與對照組比較，6-OHDA組神經(jīng)元細胞ΔΨm明顯降低（P＜0.01）；與6-OHDA組比較，加入EPO干預(yù)