重組人促紅細(xì)胞生成素對大鼠急性缺血肢體模型的神經(jīng)保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　 1.采用結(jié)扎股動脈方法制作周圍神經(jīng)缺血模型。
　　 2.探討重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)對大鼠急性缺血肢體股神經(jīng)的保護(hù)作用及意義，從而為臨床治療因急性肢體缺血而引發(fā)的神經(jīng)損傷提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.選取健康雄性Wistar大鼠48只，隨機(jī)分為重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO)組和生理鹽水(NS)組，每組設(shè)置六小時(6h)，一天(1d)，兩天(2d)，三天(3d

2、)四個不同時間點(diǎn)亞組，每組六只，通過采用單側(cè)股動脈結(jié)扎法，建立大鼠急性下肢缺血模型。于術(shù)后第6h、1d、2d、3d，rhEPO組行腹腔注射1000IU/kg rhEPO，NS組給予相同體積的生理鹽水。
　　 2.利用神經(jīng)電生理檢測方法，分別在6h，1d，2d，3d，通過閾強(qiáng)度、最大刺激強(qiáng)度以及傳導(dǎo)速度，客觀反應(yīng)股神經(jīng)感覺、運(yùn)動功能，以及神經(jīng)功能改變。
　　 3.運(yùn)用原位末端標(biāo)記技術(shù)（TUNEL），分別在6h，1d，2d，

3、3d對股神經(jīng)進(jìn)行取材，評價股神經(jīng)缺血損傷后重組人促紅細(xì)胞生成素對神經(jīng)凋亡及功能恢復(fù)的影響。
　　 4.統(tǒng)計學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，使用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，同一時間點(diǎn)不同指標(biāo)的差異使用采用t檢驗(yàn)方法，同一組不同時間點(diǎn)之間的比較采用單因素方差分析，P＜0.05定義為差別有顯著意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.大體觀察:術(shù)后NS組和rhEPO組大鼠術(shù)側(cè)足趾及腳掌的顏色均發(fā)青，隨

4、著時間的推移，NS組較rhEPO組顏色加深程度明顯。NS組大鼠5趾乏力并攏，rhEPO組大鼠5趾稍分開。兩組大鼠在術(shù)后6h即出現(xiàn)跛行，EPO組2天后跛行不明顯。無足趾破潰和皮膚潰瘍。EPO組后肢及足趾對熱、痛刺激較NS組敏感，但較健側(cè)稍差。rhEPO組大鼠運(yùn)動相對靈活，爬行速度較快，NS組活動相對局限，速度緩慢。拆除縫合線，打開縫合切口，可見術(shù)后兩組Wistar大鼠小腿肌肉都有不同程度的萎縮，顏色灰白，股神經(jīng)腫脹、增粗。
　　

5、2.神經(jīng)電生理:
　　 2.1 rhEPO組股神經(jīng)的閾強(qiáng)度分別在6h(0.008±0.005)、2d(0.180±0.011)、3d（0.022±0.0189）明顯優(yōu)于NS組，即rhEPO組股神經(jīng)的閾強(qiáng)度在6h、2d、3d中明顯低于NS組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。經(jīng)單因素方差分析可知，兩組指標(biāo)隨著時間的變化差別有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.524，P=0.014; F=7.494，P=0.001)。
　　 2.2 r

6、hEPO組股神經(jīng)的最大刺激強(qiáng)度在各個時間點(diǎn)(6h:0.219±0.088;1d:0.200±0.042;2d:0.296±0.082;3d:0.358±0.025)均優(yōu)于NS組(6h:47.778±10.472;1d:37.055±3.270;2d:34.388±4.484;3d:29.657±7.940)，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。經(jīng)單因素方差分析可知，兩組指標(biāo)隨著時間的變化差別有統(tǒng)計學(xué)意義(F=13.832, P＜0.00

7、1; F=4.478, P=0.015)。
　　 2.3 rhEPO組股神經(jīng)傳導(dǎo)速度在各個時間點(diǎn)(6h:72.225±13.607;1d:58.335±9.131;2d:53.112±6.690;3d:52.557±11.667)均優(yōu)于NS組(6h:47.778±10.472;1d:37.055±3.270;2d:34.388±4.484;3d:29.657±7.940)，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)單因素方差分析可知

8、，rhEPO組內(nèi)各時間點(diǎn)的傳導(dǎo)速度差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，NS組傳導(dǎo)速度隨時間的變化差別有統(tǒng)計學(xué)意義(F=9.482, P＜0.001; F=1.073, P=0.383)。
　　 3.神經(jīng)細(xì)胞凋亡率:rhEPO組股神經(jīng)細(xì)胞凋亡率分別在6h（0.071±0.020）和2d（0.143±0.035）明顯優(yōu)于NS組（6h:0.186±0.085;2d:0.366±0.054），差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，rhEPO組

9、股神經(jīng)細(xì)胞凋亡率明顯低于NS組，即在6h和2d這兩個時間點(diǎn)，rhEPO組股神經(jīng)細(xì)胞凋亡量少于NS組。經(jīng)單因素方差分析，兩組指標(biāo)隨著時間的變化差別有統(tǒng)計學(xué)意義(F=35.527，P＜0.001;F=24.760，P＜0.001)
　　 結(jié)論:
　　 重組人促紅細(xì)胞生成素是一種有效的神經(jīng)保護(hù)劑，早期使用重組人促紅細(xì)胞生成素可以有效減少缺血神經(jīng)元的凋亡，保護(hù)急性缺血下神經(jīng)功能以及促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)，為將來臨床上采用rhEPO贏