γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表達(dá)及調(diào)控在慢性阻塞性肺疾病中的作用研究.pdf

1、目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺內(nèi)氧化/抗氧化狀態(tài)改變,探討γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活性,表達(dá)及其基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的作用.初步闡明γ-GCS在COPD發(fā)病中的機(jī)制,為COPD的發(fā)病機(jī)理提供新的理論依據(jù),為其治療提供新的策略和方法.方法:分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn).1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):健康雄性Wistar大鼠14只,隨機(jī)分COPD模型組和對(duì)照組,每組7只.采用每日熏香煙和兩次氣管內(nèi)滴入脂多糖(LPS)法制作COPD大鼠模型.檢測(cè)

2、大鼠肺、心、肝和腎組織中GSH、ROS、T-AOC和γ-GCS活性.用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)肺、心、肝和腎組織中γ-GCS mRNA的表達(dá).用免疫組化檢測(cè)c-fos、c-jun、NF-κBp65和γ-GCS在肺組織中的表達(dá).用原位雜交和RT-PCR檢測(cè)大鼠肺組織中γ-GCS mRNA的表達(dá).2.臨床實(shí)驗(yàn):1)收集急性期COPD患者和普通體檢者血清標(biāo)本,檢測(cè)GSH、ROS、T-AOC和γ-GCS活性.2)收集腫瘤伴或不

3、伴COPD肺葉切除患者臨床標(biāo)本,用免疫組化和原位雜交方法檢測(cè)肺組織中γ-GCS及γ-GCS mRNA表達(dá).對(duì)相關(guān)指標(biāo)作相關(guān)分析.結(jié)論:1.COPD大鼠肺內(nèi)存在氧化/抗氧化失衡,通過激活γ-GCS基因表達(dá)和增強(qiáng)活性,增加GSH合成來發(fā)揮抗氧化作用,可能是抗氧化的主要機(jī)制之一.2.c-fos、c-jun和NF-κ B p65可能參與對(duì)γ-GCS mRNA的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用.3.急性期COPD患者存在全身性氧化/抗氧化失衡,總抗氧化力降低,γ-