采用載體介導(dǎo)的siRNA抑制非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士后學(xué)位論文采用載體介導(dǎo)的siRNA抑制非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：白莉申請學(xué)位級別：博士后專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：白春學(xué)20060801三耋鍵詞域皮生長因袋慨短發(fā)夾y：人肺腺癌矽株’生長凋亡p∥今第三部分靶向EGFR的siRNA重組腺病毒載體抑制肺腺癌生長的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的體內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)證重組腺病毒載體介導(dǎo)的siRNA是否能有效下調(diào)HLAC中EGFR表達(dá)及其抗腫瘤效應(yīng)。方法①構(gòu)建表達(dá)針對EGFR的shR

2、NA穿梭載體，將穿梭載體和骨架載體共轉(zhuǎn)染293包裝細(xì)胞，制備重組腺病毒(AdvshEGFR)。②AdvshEGFR體外感染HLACA549和SPC—A1，RealtimePCR檢測EGFR基因mRNA表達(dá)變化：免疫熒光、Westernblot檢測EGFR基因蛋白水平變化。⑨體外感染病毒后的HLAC進(jìn)行動物接種，測量腫瘤體積繪制腫瘤生長曲線，記錄腫瘤重量，計(jì)算腫瘤抑制率。④建立荷瘤鼠模型，瘤內(nèi)注射AdvshEGFR，測量腫瘤體積繪制生長曲

3、線，記錄腫瘤重量，計(jì)算腫瘤抑制率。利用免疫組化和Westernblot測定腫瘤組織的EGFR蛋白水平；免疫組化檢測腫瘤組織中PCNA水平：TUNEL法檢測腫瘤組織中凋亡細(xì)胞。結(jié)果感染Adv—shEGFR3d后，對A549，SPC—A1細(xì)胞中EGFRmRNA水平的抑制率分別達(dá)812％和798％；感染Adv—shEGFR3d和6d后，對A549細(xì)胞中EGFR蛋白水平抑制率分別為523％和802％，對SPCAl細(xì)胞中EGFR蛋白水平抑制率分別

4、為455％和858％。感染AdvshEGFR的A549，SPCA1細(xì)胞體內(nèi)生長能力明顯受到抑制。在A549，SPC—A1裸鼠移植瘤模型中，瘤內(nèi)注射AdvshEGFR對EGFR蛋白表達(dá)的抑制率分別為628％和524％，并明顯抑制腫瘤的生長。結(jié)論靶向EGFR的shRNA重組腺病毒載體能夠通過下調(diào)HLAC中EGFR的表達(dá)并有效抑制HLAC的體內(nèi)生長，為開發(fā)基于RNA!技術(shù)的抗腫瘤藥物提供了理論依據(jù)。【關(guān)鍵詞】表皮生長因、乇受體；短發(fā)夾RNA；