哮喘發(fā)作患者外周血嗜酸細(xì)胞差異表達(dá)基因克隆及特性研究.pdf

1、研究背景:支氣管哮喘(簡稱哮喘)是常見的慢性疾病，目前認(rèn)為哮喘是多種類型細(xì)胞控制和參與的以氣道炎癥、氣道重建及氣道反應(yīng)性增高為主要特征的慢性非特異性炎癥。由于哮喘臨床表型及對治療反應(yīng)的不均一性，哮喘更像是一種綜合征，而不是一個(gè)特殊的疾病實(shí)體。哮喘一直是全球關(guān)注的一個(gè)重要疾病，對哮喘的發(fā)病機(jī)制的研究也在不斷地深入。當(dāng)前哮喘的基礎(chǔ)研究涉及諸多領(lǐng)域，包括哮喘的遺傳學(xué)基礎(chǔ)、環(huán)境因素與哮喘、免疫機(jī)制及免疫治療、氣道炎癥及抗炎治療、氣道重建及防治措

2、施等諸多方面。分子遺傳學(xué)的研究已經(jīng)證實(shí)，哮喘是一種復(fù)雜的多基因遺傳病，哮喘的發(fā)生、發(fā)展是基因與環(huán)境因素共同導(dǎo)致的復(fù)雜過程。遺傳學(xué)為宿主對不同環(huán)境因素產(chǎn)生反應(yīng)提供了很好的基礎(chǔ)，這在復(fù)雜疾病研究上起著重要作用，因此理解基因與環(huán)境相互作用的真正分子機(jī)制也是研究者所面臨的重要挑戰(zhàn)。 近年來已經(jīng)有相當(dāng)多的針對EOS參與哮喘作用機(jī)制的研究，如對脂質(zhì)介質(zhì)、顆粒蛋白、活性氧自由基的釋放的研究等，但其遷移、粘附、凋亡、出胞、脫顆粒等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)機(jī)

3、制尚有待于進(jìn)一步探討，因此系統(tǒng)的闡述EOS的分子調(diào)控機(jī)制，也將幫助闡明哮喘的病理生理改變本質(zhì)并為未來靶向性干預(yù)及個(gè)性化治療提供理論基礎(chǔ)。因此本研究篩選哮喘患者在發(fā)作期與緩解期外周血EOS差異表達(dá)基因，以探索其參與哮喘的分子本質(zhì)。 目的本研究首先從哮喘治療前后患者外周血獲得高純度的EOS，通過SuperSMARTcDNAsynthesis技術(shù)獲得質(zhì)量及純度較高的cDNA；再采用抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)，篩選哮喘患者外周血EOS

4、與哮喘發(fā)作有關(guān)的差異表達(dá)基因，探索EOS參與哮喘的分子機(jī)制；進(jìn)一步研究這些基因功能可能為未來哮喘早期診斷及針對炎性靶細(xì)胞治療提供可能的依據(jù)。 結(jié)論: 一、哮喘的發(fā)生發(fā)展是一系列細(xì)胞與分子事件的結(jié)果，是許多與哮喘相關(guān)基因表達(dá)失常所致。 二、SSH是具有高敏感性、高效率及雜交結(jié)果代表性較高的一種基因表達(dá)分析方法，結(jié)合SuperSMARTcDNAsynthesis技術(shù)則可對少量總RNA進(jìn)行差異表達(dá)分析，這也為臨床只可獲

5、得微量樣本的基因表達(dá)分析提供新的思路。 三、本研究篩選出眾多與哮喘發(fā)作有關(guān)的EOS差異表達(dá)基因，這些基因涉及細(xì)胞分化、凋亡與存活、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸、細(xì)胞趨化、氧化應(yīng)激等，可能通過延遲EOS凋亡，促進(jìn)EOS向肺部聚集，調(diào)節(jié)炎性介質(zhì)釋放，分泌促粘膜下基質(zhì)沉積蛋白，免疫調(diào)控肺微環(huán)境及增加氧自由基釋放等機(jī)制，從而參與調(diào)節(jié)哮喘氣道炎癥、氣道上皮損傷所致AHR及氣道重建等病理生理過程，其也可能為哮喘易感基因，并可能發(fā)現(xiàn)新的過敏性哮喘氣道炎癥通