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文檔簡介
1、目的:
nel樣Ⅰ型基因(nel-like typeⅠ gene,nell-1)是一種在顱縫早閉者早閉區(qū)過度表達的新型基因,因其與在雞神經(jīng)中特異性表達的nel基因結(jié)構(gòu)十分相似,故命名為nel樣Ⅰ型基因。nell-1基因具有調(diào)節(jié)成骨相關基因表達、誘導成骨細胞分化和促進骨質(zhì)形成的作用。其編碼形成的蛋白Nell-1是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種具有類表皮細胞生長因子編碼結(jié)構(gòu)并在顱面部等神經(jīng)嵴來源的組織中特異性表達的分泌性蛋白。動物實驗及體
2、外實驗表明,Nell-1可特異性地誘導成骨細胞分化,促進礦化,誘導骨的形成及再生。
研究表明,nell-1是Runx2的下游基因,受Runx2的直接調(diào)控。Runx2(Runt-related transcription factor2),作為骨和牙胚發(fā)育過程中的重要轉(zhuǎn)錄因子,通過調(diào)節(jié)成骨細胞和成牙本質(zhì)細胞的分化,調(diào)控相關目的基因的表達來促進硬組織的形成和牙胚的發(fā)育。
牙體組織與顱面骨均為神經(jīng)嵴來源,成牙本質(zhì)細
3、胞和成骨細胞都來源于間充質(zhì)細胞,基因結(jié)構(gòu)上具有很多相似性;并且nell-1受骨和牙胚發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子Runx2的直接調(diào)控,因此我們推測Nell-1可能在牙胚發(fā)育,成牙本質(zhì)細胞分化和牙本質(zhì)形成中同樣發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。
基于以上推測,本課題的目的為通過免疫組織化學的方法研究Nell-1在小鼠牙胚發(fā)育及人牙髓牙本質(zhì)復合體中的表達和分布,為研究Nell-1在牙胚發(fā)育和牙本質(zhì)形成的作用提供實驗依據(jù)。
方法、結(jié)果和結(jié)論:<
4、br> 實驗一:利用免疫組織化學技術(shù)檢測Nell-1在小鼠第一磨牙牙胚發(fā)育過程中的表達和分布,初步研究Nell-1在牙胚發(fā)育中的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示Nell-1在小鼠第一磨牙牙胚發(fā)育過程中的不同階段呈現(xiàn)不同的表達和分布。在胚胎第13.5天(E13.5)和E14.5,Nell-1表達于整個成釉器和其中周圍的間充質(zhì)細胞中。在E16.5天,Nell-1在內(nèi)釉上皮層、外釉上皮層、中間層、第二釉結(jié)和牙乳頭細胞中有表達。在E18.5天,Nell
5、-1的陽性表達見于發(fā)育中的成釉細胞和成牙本質(zhì)細胞、中間層及外釉上皮層。在出生后第2.5天(P2.5)、P5和P7,Nell-1表達于成熟的成釉細胞和成牙本質(zhì)細胞(包括成牙本質(zhì)細胞的胞體和突起)以及未成熟的釉質(zhì)中。在P7天出現(xiàn)的上皮根鞘中,Nell-1也呈陽性表達。在P13.5天,Nell-1的陽性表達僅見于縮余釉上皮和成牙本質(zhì)細胞,而在成熟的釉質(zhì)中無表達。在小鼠第一磨牙萌出過程中(P28),Nell-1僅在成牙本質(zhì)細胞的胞體和突起以及血
6、管內(nèi)皮細胞中表達。因此,Nell-1在牙胚發(fā)育過程中的時空表達提示,Nell-1可能在成釉細胞和成牙本質(zhì)細胞的分化、釉質(zhì)基質(zhì)的分泌和礦化、牙冠的形態(tài)發(fā)生以及牙根形成中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。
實驗二:通過收集并制備離體人牙標本,利用免疫組織化學技術(shù),研究Nell-1在人牙髓牙本質(zhì)復合體中的分布及表達情況,初步探討Nell-1在牙本質(zhì)形成中的作用。實驗結(jié)果顯示,在正常及齲壞人牙髓牙本質(zhì)復合體中,Nell-1均表達于成牙本質(zhì)細胞(
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