DFMG對LPC誘導HUVE-12活性氧產(chǎn)生及線粒體凋亡途徑的影響.pdf

1、目的:探討新型金雀異黃素(genistein,GEN)類似物7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀異黃素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein,DFMG)拮抗溶血性磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine,LPC)誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVE-12)凋亡是否涉及阻斷活性氧產(chǎn)生及由活性氧觸發(fā)的線粒體凋亡途徑。
　　 方法:體外培養(yǎng)HUVE-12,LPC(0,3,10

2、,30,100μmol/L)處理24 h,應用流式細胞術檢測活性氧平均熒光強度,探索和確定LPC誘導HUVE-12活性氧生成模型的濃度。0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG預孵育30 min,30μmol/L的LPC處理HUVE-1224 h,應用流式細胞術檢測DFMG作用后LPC誘導HUVE-12活性氧生成和線粒體膜電位崩塌的影響,用熒光顯微鏡觀察比較各組細胞熒光染色狀態(tài)；應用Western blotting分析DFMG對LP

3、C誘導HUVE-12活性氧生成模型細胞色素C、磷酸化JNK和PARP蛋白表達的影響。
　　 結果:①LPC30μmol/L孵育HUVE-1224 h后活性氧產(chǎn)生顯著增加,平均熒光強度高達188.28±11.16,與細胞對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);作為后續(xù)實驗中LPC誘導HUVE-12活性氧生成模型的造模濃度。②0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG呈濃度依賴性減少LPC誘導HUVE-12活性氧產(chǎn)生,與L

4、PC30μmol/L模型組比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001),平均熒光強度分別為99.48±2.51,94.13±3.35,72.594-3.54；較相應濃度GEN作用后的熒光強度(118.64±6.70,106.41±4.62,86.55±4.26)低(P<0.05)。③LPC30μmol/L細胞孵育24 h后,HUVE-12線粒體膜電位水平顯著下降(3601.91±1.43),與細胞對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.00

5、1):0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG以濃度依賴方式拮抗LPC誘導HUVE-12線粒體膜電位水平下降,與LPC30μmol/L模型組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001),其線粒體膜電位分別為5084.93±4.52,5118.24±7.99,5741.19±3.80,較相應濃度GEN預孵育后的線粒體膜電位(4917.24±3.36,5032.08±3.49,5554.86±6.50高(P<0.05)。④LPC使HUVE-

6、12凋亡相關蛋白細胞色素C、磷酸化JNK、PARP蛋白表達上調(diào),LPC模型組的細胞色素C、磷酸化JNK、PARP蛋白產(chǎn)物條帶與β-actin產(chǎn)物條帶積分光密度值之比為0.29、0.69、1.20,分別是DFMG實驗組的3.62倍、2.09倍、2.45倍,是GEN實驗組的1.81倍、1.44倍、1.76倍,提示DFMG、GEN均可下調(diào)LPC損傷后上述蛋白的表達,DFMG的這種作用較相同濃度的GEN強。
　　 結論:DFMG拮抗LP