環(huán)氧化酶-2在肺癌發(fā)病中的作用及環(huán)氧化酶-2抑制劑對(duì)肺癌治療作用的研究.pdf

1、肺癌的發(fā)病率及病死率已躍居各類惡性腫瘤的前列,闡明肺癌的發(fā)病機(jī)制、提高肺癌的治療效果具有十分重要的意義.近年研究發(fā)現(xiàn),環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,COX)的誘導(dǎo)型,即COX-2在多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào),流行病學(xué)觀察及細(xì)胞學(xué)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等研究發(fā)現(xiàn)非甾體類抗炎藥(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)及COX-2抑制劑對(duì)結(jié)、直腸癌有防治作用,但COX-2在腫瘤發(fā)病中的作用及COX-

2、2抑制劑的作用機(jī)制尚不完全清楚.該研究應(yīng)用分子生物學(xué)的技術(shù)和方法,經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn),對(duì)COX-2在肺癌發(fā)病中的作用及COX-2抑制劑治療肺癌的機(jī)制進(jìn)行了探討,以期為肺癌的臨床治療提供新的思路和理論依據(jù).第一部分 環(huán)氧化酶-2在肺癌組織中的表達(dá)及意義;目的:研究COX-2在肺癌組織中的表達(dá)及其與臨床及病理特征之間的關(guān)系.方法:逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)56例肺癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織、12例肺良性病變組織COX-2 mRN

3、A的表達(dá),免疫組織化學(xué)法及Western blot檢測(cè)肺癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織COX-2蛋白的表達(dá).第二部分環(huán)氧化酶-2抑制劑對(duì)肺癌環(huán)氧化酶-2表達(dá)及代謝的影響;目的:探討COX-2抑制劑Nimesulide(NIM)對(duì)肺癌COX-2基因、蛋白表達(dá)和代謝產(chǎn)物前列腺素E<,2>(PGE<,2>)的影響以及NIM體內(nèi)應(yīng)用的安全性.方法:1.體外實(shí)驗(yàn):培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞,以不同NIM濃度(25、50、100、200 μ mol/L)干

4、預(yù)A549細(xì)胞24h、48h、72h,放射免疫法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液PGE<,2>水平;NIM(25、50、100、200 μ mol/L)干預(yù)A549細(xì)胞48 h,RT-PCR、Western blot及免疫細(xì)胞化學(xué)法分別檢測(cè)A549細(xì)胞COX-2 mRNA、蛋白的表達(dá).2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立裸鼠移植瘤模型,NIM組于A549細(xì)胞接種前一天開(kāi)始NIM 6mg/kg灌胃,每天一次,35d;對(duì)照組等量生理鹽水灌胃.RT-PCR、Western

5、blot及免疫組織化學(xué)法分別檢測(cè)移植瘤COX-2 mRNA、蛋白的表達(dá);NIM組裸鼠肝、腎及胃腸道組織行HE染色.第三部分環(huán)氧化酶-2與肺癌血管生成關(guān)系的研究;分題一肺癌組織環(huán)氧化酶-2基因的表達(dá)及與VEGF、CD<,105>關(guān)系的研究;目的:探討肺癌組織COX-2的表達(dá)及與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、CD<,105>的關(guān)系.方法:RT-PCR檢測(cè)56例肺癌組織COX-2 mRNA的表達(dá),免疫組織化學(xué)法檢測(cè)VEGF、CD<,105>蛋

6、白的表達(dá),以CD<,105>計(jì)數(shù)微血管密度(MVD).分題二環(huán)氧化酶-2抑制劑對(duì)肺癌VEGF、Angs基因表達(dá)的影響目的:探討COX-2抑制劑NIM對(duì)VEGF及血管生成素(Angs)基因表達(dá)的影響及意義.方法:1.體外實(shí)驗(yàn):培養(yǎng)人肺腺癌A549細(xì)胞,NIM(25、50、100、200 μmol/L)干預(yù)48h,RT-PCR檢測(cè)A549細(xì)胞VEGF、Ang-1及Ang-2 mRNA的表達(dá).2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立裸鼠移植瘤模型,NIM組于A54

7、9細(xì)胞接種前一天開(kāi)始NIM 6mg/kg灌胃,每天一次,35d;對(duì)照組等量生理鹽水灌胃.RT-PCR檢測(cè)移植瘤VEGF、Ang-1及Ang-2 mRNA的表達(dá).第四部分環(huán)氧化酶-2與肺癌增殖及凋亡關(guān)系的研究;分題一環(huán)氧化酶-2抑制劑對(duì)肺癌細(xì)胞周期及增殖凋亡的影響;目的:探討COX-2抑制劑NIM對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞細(xì)胞周期、增殖凋亡和裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及可能機(jī)制.分題二環(huán)氧化酶-2抑制劑聯(lián)合順鉑治療肺癌的探討;目的:探討COX-2抑