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文檔簡介
1、肽聚糖識別蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)作為一個主要的模式識別受體,在家蠶Bombyx mori的天然免疫中具有重要的作用。本研究主要探討家蠶PGRP-L1基因的功能及其所參與的免疫信號通路。本實驗通過RT-PCR擴增獲得家蠶PGRP-L1基因。利用微生物誘導(dǎo)實驗對5齡起蠶分別注射大腸桿菌Escherichia coli、釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、
2、枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis和PBS,12 h后取體壁和頭部提取RNA,然后采用RT-PCR和凝膠電泳技術(shù)測定BmPGRP-L1基因的表達水平;利用RNA干涉實驗向5齡起蠶注射PGRP-L1 dsRNA或PBS,6 h后再分別注射3種滅活的微生物或PBS,然后檢測家蠶體壁及頭部的免疫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Rel,Cactus和Relish)以及家蠶多個抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)基因(攻擊素
3、、Moricin、葛佬素)的表達情況。
本文從家蠶的組織中克隆了BmPGRP-L1基因,通過序列分析發(fā)現(xiàn)BmPGRP-L1與果蠅的DmPGRP-LC的相似度較高,而果蠅的DmPGRP-LC在被革蘭氏陰性菌感染后從而激活I(lǐng)md途徑,那么家蠶BmPGRP-L1是否參與Imd信號通路?
微生物誘導(dǎo)實驗顯示注射大腸桿菌的實驗組比注射PBS的對照組BmPGRP-L1基因轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào),而注射釀酒酵母和枯草芽孢桿菌的實驗組Bm
4、PGRP-L1轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有變化;利用RNAi技術(shù)成功敲低BmPGRP-L1表達。對5齡敲低的家蠶注射滅活的微生物,敲低實驗組relish因子表達低于正常對照組,相應(yīng)地抗菌肽表達也有不同程度的下調(diào)。
微生物誘導(dǎo)實驗結(jié)果顯示BmPGRP-L1基因參與家蠶對革蘭氏陰性菌大腸桿菌的免疫響應(yīng);RNAi實驗結(jié)果顯示BmPGRP-L1基因在家蠶的體壁和頭中參與Imd信號通路。這些結(jié)果說明BmPGRP-L1基因在家蠶的先天性免疫中扮演著重要的
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