肝癌細胞粘附和收縮調(diào)節(jié)對Rho蛋白表達影響的實驗研究.pdf

1、Rho蛋白是細胞內(nèi)多條信號轉(zhuǎn)導通路的關鍵分子，可參與對正常細胞增殖、分化、凋亡的調(diào)控，其表達受到細胞骨架功能狀態(tài)的反饋調(diào)節(jié)。在腫瘤細胞中Rho蛋白表達普遍增高，Rho蛋白表達異常與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關。由于腫瘤細胞骨架發(fā)育存在缺陷，由此導致的骨架功能異常與其Rho蛋白表達增高是否存在相關性。本課題研究細胞不同的粘附和收縮行為對Rho蛋白表達和細胞遷移運動特性的影響，從而探索肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的過程機制。
　　目的：本文通過控制細

2、胞粘附和收縮行為，比較正常肝細胞和肝癌細胞在不同預張力狀態(tài)下其Rho蛋白表達變化的趨勢，以及這種改變對細胞遷移、增殖特性的影響，這對揭示肝癌細胞遷移行為的胞內(nèi)分子基礎有一定意義。
　　方法：運用細胞形態(tài)學觀察，免疫組織化學技術，分別對肝癌細胞，正常肝細胞Rho蛋白表達水平，以及FN裱襯前后肝癌細胞遷移運動能力進行檢測和分析；通過免疫熒光實驗技術對裱襯FN的不同粘附狀態(tài)，用MLCK抑制劑ML-7作用下細胞的不同收縮狀態(tài)，以及機械加載

3、條件下肝癌細胞、正常肝細胞骨架變化和Rho蛋白表達分布進行檢測和定量分析，從而了解細胞骨架結(jié)構功能狀態(tài)對Rho蛋白表達分布的影響趨勢，以及這些改變與肝癌細胞遷移增殖行為變化的相關性。
　　結(jié)果：（1）肝癌細胞 Rho蛋白的基礎水平高于正常肝細胞；裱襯1-5μg/ml FN肝癌細胞Rho蛋白表達水平升高，裱襯10-20μg/ml FN Rho蛋白表達水平下降，但裱襯40μg/ml FN Rho蛋白表達水平開始上調(diào)；而在正常肝細胞中裱

4、襯FN后Rho蛋白表達水平顯著降低；（2）隨著裱襯FN濃度的增加，HepG2肝癌細胞粘附率增加，對增殖的抑制作用越發(fā)明顯；（3）裱襯低濃度FN（2μg/ml），細胞遷移運動能力明顯增加，而高濃度FN（20μg/ml）時，細胞在1h的凈位移和遷移軌跡離散度均減少；（4）MLCK抑制劑ML-7低濃度（6μM）使正常肝細胞Rho蛋白表達下調(diào)，而對肝癌細胞Rho蛋白無明顯影響，ML-7高濃度（10μM）肝癌細胞骨架解聚，較正常細胞明顯；兩組細胞