灰飛虱免疫相關(guān)基因及β-微管蛋白基因的克隆和分子鑒定.pdf

1、灰飛虱(Laodelphax striatellus)是水稻條紋葉枯病毒(RSV)等病毒的介體,可傳播水稻條紋葉枯病等嚴(yán)重的水稻病害.為了了解灰飛虱的先天免疫及其與病毒之間的相互作用,本實(shí)驗(yàn)利用抑制消減雜交法(SSH)試圖克隆與E.coli免疫刺激及RSV感染有關(guān)的免疫相關(guān)基因.經(jīng)三輪篩選后,從E. coli免疫刺激消減文庫中得到44個(gè)陽性克隆,從RSV感染消減文庫中得到13個(gè)陽性克隆.將陽性克隆插入片段測(cè)序并繼續(xù)同源搜索后發(fā)現(xiàn):其中2

2、2條差異表達(dá)片段與13種不同的基因或基因家族有較高的同源性,有些基因已經(jīng)被證實(shí)與先天免疫相關(guān),其余的差異表達(dá)片段與已知的基因沒有同源性,可能是新基因.對(duì)來自RSV感染消減文庫的一個(gè)免疫相關(guān)基因Mucin進(jìn)行Northern雜交分析,結(jié)果顯示只能在RSV感染的灰飛虱中檢測(cè)到它的轉(zhuǎn)錄物,推測(cè)該基因的表達(dá)與RSV感染有關(guān),從而也證明了作為一種快速便捷的方法,SSH可以有效地應(yīng)用于灰飛虱免疫相關(guān)基因的克隆.另外,本研究還利用RT-PCR技術(shù),克

3、隆了灰飛虱體內(nèi)β3-微管蛋白基因部分序列,并進(jìn)一步通過3'-和5'-RACE獲得了全基因序列.序列分析表明,該基因(LSTUB3)長1859 bp,編碼的蛋白含454個(gè)氨基酸,分子量約為51 kDa;類似于其他昆蟲的β-微管蛋白,LSTUB3含有兩個(gè)氨基酸保守區(qū):NNWAKGHY和RKAFLHWYTGEGMDEMEFTEF.另外,LSTUB3還具有一個(gè)由六個(gè)氨基酸組成的β3-微管蛋白特征性的插入序列:CASRGG.結(jié)合已發(fā)表的其他昆蟲該