Bcl-2ASODN及bax聯(lián)合轉(zhuǎn)染增強人宮頸癌Hela細胞放射敏感性的實驗研究.pdf

1、目的:研究凋亡抑制基因bcl-2反義寡核苷酸(ASODN)和促凋亡基因bax聯(lián)合轉(zhuǎn)染對宮頸癌Hela細胞凋亡的影響以及對裸鼠皮下移植瘤的生長抑制作用，進而探求其放射增敏作用。 方法:用逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒感染Hela細胞，獲得Hela-bax細胞，然后，將bcl-2ASODN轉(zhuǎn)染Hela及Hela-bax細胞，36h后放射治療，通過MTT法、細胞形態(tài)學(xué)及流式細胞儀檢測細胞增殖與凋亡，半定量RT-PCR測定bcl-2及bax基因的表達。

2、運用Balb/c裸鼠建立宮頸癌移植瘤模型，隨機分成正常對照組、bcl-2 SODN治療組、bcl-2ASODN組、bax組和雙基因聯(lián)合治療組，分別處理后定期測量腫瘤體積，并計算抑瘤率，并在治療結(jié)束后應(yīng)用缺口末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)(TUNEL法)檢測移植瘤細胞的凋亡。 結(jié)果:Hela細胞經(jīng)bcl-2ASODN及bax聯(lián)合轉(zhuǎn)染并放療后，光鏡觀察有明顯凋亡趨勢，MTT法及流式細胞儀檢測其凋亡率明顯高于單基因轉(zhuǎn)染+放療組(P<0.

3、05)，RT-PCR結(jié)果顯示bax基因表達顯著增強，而bcl-2基因表達較各對照組則明顯減弱。體內(nèi)實驗25只裸鼠2周后均達成瘤標準，并在治療第17天后，bcl-2ASODN組及bax組的抑瘤率與對照組、SODN組比較開始有顯著性差異(P<0.01)；治療第21天時，采用<'60>Co γ射線6Gy對移植瘤單次照射；治療結(jié)束時雙基因組抑瘤率為40.0﹪，與其他組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；TUNEL法檢測移植瘤細胞凋亡結(jié)果顯示，高