腎細(xì)胞癌中發(fā)育調(diào)控基因Pax2的克隆化與功能研究.pdf

1、設(shè)計(jì)該課題擬完成以下幾個(gè)方面的工作:(1)分別從蛋白和分子水平檢測(cè)Pax2在人正常腎實(shí)質(zhì)和RCCX組織中的表達(dá)方式,以探討Pax2是否是RCC發(fā)生過程中頻發(fā)、具有較高特異性的基因,明確Pax2在RCC中作用的重要性.(2)從人RCC組織中克隆Pax2基因,建立hPax2高效原核表達(dá)載體,制備、純化重組的hPax2蛋白,以探討hPax2基因克隆化、rhPax2制備和純化的簡(jiǎn)單有效方法,為進(jìn)一步的臨床研究奠定基礎(chǔ).(3)RCC患者外周血PB

2、MCs,體外在不同的條件下經(jīng)誘導(dǎo)、培養(yǎng)獲得未成熟DCs和成熟DCs,以探討能否自RCC患者外周血中誘導(dǎo)培養(yǎng)出大量、不同免疫活性DCs.(4)構(gòu)建hPax2高效真核表達(dá)載體,并用hPax2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染未成熟DCs,制備hPax2/DCs疫苗,在體外誘發(fā)hPax2特異性的CTLs反應(yīng),探討hPax2/DCs疫苗臨床應(yīng)用的可行性.結(jié)論:(1)發(fā)育調(diào)控基因Pax2不僅是胚胎發(fā)育過程中的重要調(diào)控基因,而且在RCC的發(fā)生發(fā)展過程中起決定性作用,其突

3、變性再激活是RCC發(fā)生的關(guān)鍵,被認(rèn)為是一原癌基因,提示Pax2是RCC頻發(fā)且具有較高特異性事件.(2)該研究首次從人RCC組織中成功克隆hPax1基因,所構(gòu)建的原核表達(dá)載體pTrcHis2B-hPax2,能夠快速、高效制備rhPax2蛋白,為進(jìn)一步闡明RCC發(fā)生的分子機(jī)制以及為RCC的基因和免疫治療奠定了基礎(chǔ).(3)RCC患者外周血PBMCs,體外在不同條件下誘導(dǎo)、培養(yǎng)、抗原負(fù)載,能夠獲得大量、不同免疫活性的DCs.(4)真核表達(dá)載體p