β2受體激動(dòng)劑對(duì)癌性惡病質(zhì)干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建癌性惡病質(zhì)動(dòng)物模型，觀察經(jīng)β2受體激動(dòng)劑福莫特羅干預(yù)后，癌性惡病質(zhì)小鼠一般狀態(tài)及去瘤體重、生化指標(biāo)、血清細(xì)胞因子、骨骼肌中Myostatin蛋白、生存期的改變，初步探討β2受體激動(dòng)劑早期抗惡病質(zhì)作用及可能機(jī)制。
　　 方法：選取健康雄性BALB/c小鼠82只隨機(jī)分為5組，健康對(duì)照組（HC）：10只，生理鹽水組（CC）：18只，甲羥孕酮組（MPA）：18只，預(yù)防用藥組（PG）：18只，福莫特羅組（FG）：18只

2、。將鼠結(jié)腸腺癌26（colon26）細(xì)胞株接種于CC組、MPA組、PG組、和FG組小鼠右腋窩皮下，構(gòu)建癌性惡病質(zhì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，HC組小鼠接種等量生理鹽水，隨機(jī)從各荷瘤組小鼠取出8只用于觀察生存期。3-5天后各荷瘤小鼠皮下均可觸及瘤結(jié)節(jié)，PG組開(kāi)始腹腔注射福莫特羅（2mg·kg-1·d-1）。荷瘤第15天小鼠進(jìn)入癌性惡病質(zhì)階段后，F(xiàn)G組開(kāi)始腹腔注射福莫特羅（2mg·kg-1·d-1），CC組給予等量生理鹽水腹腔注射，MPA組甲羥孕酮（12

3、0mg·kg-1·d-1）灌胃，連續(xù)給藥1周后，處死全部研究藥效小鼠并留取標(biāo)本，其余用于觀察生存期的小鼠繼續(xù)給藥，記錄自然死亡時(shí)間。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定各組營(yíng)養(yǎng)代謝指標(biāo)，放射免疫法測(cè)定血清腫瘤壞死因子α（TNF-α）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）的水平，普通光學(xué)顯微鏡下觀察腓腸肌纖維萎縮情況，免疫組化方法測(cè)定小鼠腓腸肌中肌肉生長(zhǎng)抑制素（Myostatin）蛋白的表達(dá)情況，觀察比較這些指標(biāo)在各組小鼠之間的差異。用SPSS13.0

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（（）±s）的形式表示，多組間均數(shù)差異性比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。
　　 結(jié)果：
　　 1.動(dòng)物模型：將colon26癌細(xì)胞接種于各組小鼠皮下，3-5天后各荷瘤組均可觸及瘤結(jié)節(jié)，一般情況無(wú)明顯變化。荷瘤15天，荷瘤小鼠出現(xiàn)皮毛粗糙、厭食、去瘤體重下降10％以上，即進(jìn)入癌性惡病質(zhì)狀態(tài)。
　　 2.一般狀況及去瘤體重：試驗(yàn)初，各組小鼠體重?zé)o明顯

5、差異（P>0.05）。荷瘤第15天CC組小鼠飲食量及一般狀況惡化最明顯，MPA組、PG組、FG組攝食量較CC組略多；MPA組、PG組、FG組較CC組的終末去瘤體重增加（P<0.05）；PG組較MPA組、FG組能顯著增加終末去瘤體重（P<0.05）；FG組去瘤體重大于MPA組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3.生化指標(biāo)：各荷瘤組小鼠呈現(xiàn)不同程度的代謝紊亂。CC組小鼠血糖低于其余各組（P<0.05）；藥物干預(yù)后：MPA組、

6、PG組、FG組較CC組能提高血清中血糖含量，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；MPA組血清中總膽固醇較CC組下降（P<0.05）；CC組小鼠血漿總蛋白水平較HC組小鼠無(wú)明顯降低（P>0.05）；各荷瘤組小鼠血漿總蛋白水平與HC組相比亦無(wú)明顯差別（P>0.05）。
　　 4.血清細(xì)胞因子：各組荷瘤小鼠血清TNF-α顯著高于HC組（P<0.05）；藥物干預(yù)后MPA組、PG組、FG組小鼠血清TNF-α較CC組顯著降低（P<0.05）；P

7、G組小鼠血清中TNF-α水平明顯低于MPA組（P<0.05）；FG組小鼠血清TNF-α水平低于MPA組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；PG組較FG組能明顯降低血清TNF-α（P<0.05）。
　　 各組荷瘤小鼠血清IGF-1水平明顯低于HC組（P<0.05）；藥物干預(yù)后MPA組、PG組、FG組小鼠血清IGF-1水平與CC組無(wú)明顯差別（P>0.05）。
　　 5.小鼠腓腸肌濕重：各組荷瘤小鼠腓腸肌濕重較HC組有明顯下降（P

8、<0.05）；PG組、FG組小鼠腓腸肌濕重明顯大于CC組、MPA組（P<0.05）；PG組小鼠腓腸肌濕重明顯大于FG組（P<0.05）；MPA組小鼠腓腸肌濕重與CC組之間無(wú)明顯差別（P>0.05）。
　　 6.普通光學(xué)顯微鏡下觀察腓腸肌萎縮程度：各組荷瘤小鼠腓腸肌均有不同程度萎縮，橫截面最大橫徑均小于HC組（P<0.05），其中CC組最明顯；藥物干預(yù)后PG組、FG組小鼠腓腸肌纖維橫截面最大橫徑明顯大于CC組、MPA組（P<0.0

9、5）；PG組小鼠腓腸肌纖維橫截面最大橫徑大于FG組，有顯著差別（P<0.05）；CC組與MPA組比較無(wú)明顯差別（P>0.05）。
　　 7.腓腸肌中Myostatin蛋白表達(dá)：各組荷瘤小鼠Myostatin蛋白表達(dá)水平均明顯高于HC組（P<0.05）；藥物干預(yù)后PG組、FG組小鼠腓腸肌中Myostatin蛋白表達(dá)量較CC組明顯降低（P<0.05）；MPA組與CC組比較無(wú)明顯差別（P>0.05）；PG組小鼠腓腸肌中Myostati

10、n蛋白表達(dá)明顯低于FG組（P<0.05）。
　　 8.各組生存期：治療后MPA組、PG組、FG組生存時(shí)間較CC組明顯延長(zhǎng)（P<0.05）：CC組8只小鼠中位生存期為23.38天；MPA組8只小鼠中位生存期為26.13天；PG組8只小鼠中位生存期為26.25天；FG組8只小鼠中位生存期為28.50天。MPA組小鼠的生存時(shí)間與PG組無(wú)明顯差別（P>0.05）；FG組較PG組能明顯延長(zhǎng)生存時(shí)間（P<0.05）。
　　 結(jié)論：<

11、br>　　 1.本試驗(yàn)成功構(gòu)建了癌性惡病質(zhì)動(dòng)物模型，癌細(xì)胞造成宿主動(dòng)物進(jìn)食減少、體重下降，骨骼肌消耗表現(xiàn)更為突出。為研究癌性惡病質(zhì)中骨骼肌蛋白降解的機(jī)制及其早期防治提供了的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 2.癌性惡病質(zhì)小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子水平發(fā)生改變：TNF-α是癌性惡病發(fā)生機(jī)制中一重要細(xì)胞因子；藥物干預(yù)不能改變血清IGF-1水平。
　　 3.甲羥孕酮可增加惡病質(zhì)小鼠終末去瘤體重，降低血清TNF-α水平，調(diào)節(jié)代謝，但對(duì)于骨骼肌的增重作用

12、不明顯。
　　 4.β2受體激動(dòng)劑福莫特羅可以抑制骨骼肌蛋白的降解而發(fā)揮抗惡病質(zhì)作用；對(duì)調(diào)節(jié)代謝無(wú)效。應(yīng)用該藥還能減緩腓腸肌重量的下降，從而增加去瘤體重，與甲羥孕酮機(jī)制不同。
　　 5.癌性惡病質(zhì)骨骼肌分泌的Myostatin對(duì)泛素相關(guān)基因有上調(diào)的作用，最終通過(guò)泛素蛋白酶途徑降解骨骼肌蛋白，通過(guò)研究β2受體激動(dòng)劑對(duì)Myostatin表達(dá)的調(diào)控，可以使逆轉(zhuǎn)惡病質(zhì)發(fā)生在更早階段，達(dá)到預(yù)防的目的。
　　 6.醋酸甲羥孕