腸產(chǎn)毒性大腸桿菌檢測基因芯片的研制.pdf

1、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(Enterotoxigenic Eschericbia coli，ETEC)是引起發(fā)展中國家嬰幼兒腹瀉以及熱帶或亞熱帶地區(qū)旅游者腹瀉的主要病原菌。它通過釋放腸毒素，引起人體腸液分泌紊亂，有時(shí)導(dǎo)致代謝性酸中毒、高血鉀癥和心力衰竭等并發(fā)癥，嚴(yán)重危害人們的健康。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確的。ETEC檢測技術(shù)是當(dāng)前腸道感染疾病的診斷、治療和監(jiān)控等工作迫在眉捷的需要。
　　 腸產(chǎn)毒性大腸桿菌的常見的血清群有O6、O8、O1

2、1、O15、O25、O27、O78、O85、O114、O115、O126、O128、O139、O148、O149、159、O166、O167、O173等19種；事實(shí)上，細(xì)菌需表達(dá)LT、STp、STh、STb等四種腸毒素的至少一種才可被鑒定為是ETEC。本文通過對以上19個(gè)不同O血清群大腸桿菌各自所特異的寡糖單位處理酶基因wzx及wzy(或wzt、wzm基因)、以及對ETEC所特有四種腸毒素編碼基因elt、estA(h)、estA(p)、

3、estB基因分別設(shè)計(jì)寡核苷酸探針，利用基因芯片檢測技術(shù)對ETEC菌株進(jìn)行O血清群分群和毒素鑒定。經(jīng)過反復(fù)篩選驗(yàn)證得到的特異探針有48條，熒光定位探針1條，以細(xì)菌16S rRNA基因?yàn)榘行蛄性O(shè)計(jì)的的正對照探針1條，以及由多聚T構(gòu)成的負(fù)對照探針1條，共計(jì)51條。而在靶基因的擴(kuò)增環(huán)節(jié)，本文采用的是全基因組隨機(jī)引物PCR法，先后只用兩條引物便可完成對細(xì)菌DNA進(jìn)行全基因組范圍的擴(kuò)增，有效克服了在Multiplex PCR中不可避免的引物相互干擾