轉基因?；蛐酒瑱z測方法的建立.pdf

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位是本人在導師指導下進行的研究工作和取得的研究成果o本論文中除引文外，所有實驗、數據和有關材料均是真實的。本論文中除引文和致謝的內容外，不包含其他人或其它機構已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學位論文作者簽名：雹氣力日期：卅lf、支3。學位論文使用授權聲明研究生在校攻讀學位期間論文工作的知識產權單位屬南京師范大學。學校有權保存本學位論文的電子

2、和紙質文檔，可以借閱或上網公布本學位論文的部分或全部內容，可以采用影印、復印等手段保存、匯編本學位論文。學校可以向國家有關機關或機構送交論文的電子和紙質文檔，允許論文被查閱和借閱。(保密論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋：本學位論文屬于保密論文，保密期限為年。學位論文作者簽名：耋令考日期：加JI工妒指導教師簽名：／￡_!之C日期：枷【／r、；Q摘要摘要轉基因技術是把“雙刃劍”在給人類帶來經濟和社會利益的同時，也引發(fā)了許多問題。因轉基因

3、動物是人類將所需要的優(yōu)良基因轉入受體體內所得，并非自然界本來存在，所以比自然界本來存在的生物更具生存優(yōu)勢和競爭力，同時也加大了它的潛在威脅。短期內轉基因動物對人類健康的直接影響較小，但是長期、潛在的影響還很難定論；其可能還會通過跨物種感染影響生態(tài)環(huán)境和生物多樣性，因此轉基因動物的安全性有待進一步考察。隨著轉基因技術的發(fā)展，轉基因動物商品化的范圍會逐步擴大，為做到防患于未然，有必要進行科學的檢測。目前GMO的檢測主要集中在轉基因作物及其產

4、品方面，轉基因動物的檢測體系還未建立完善，因此對轉基因動物及其產品檢測方法的研究在口岸未來的監(jiān)測工作中具有一定的意義。轉基因產品的檢測目前主要是以PCR為主的DNA檢測方法和蛋白質檢測方法，一次只能檢測一個基因或一種樣品，已不能滿足現階段轉基因產品種類和數量不斷增多的現狀。寡核苷酸基因芯片因具有高通量、微型化的特點，可以對同一轉基因樣品進行不同方面的分析以及對多種轉基因樣品同時進行檢測，適合轉基因產品的檢測本研究是應用基因芯片結合多重P

5、CR的方法對轉基因牛進行檢測，首先根據能代表種屬特異性的線粒體基因：牛線粒體16srRNA基因(BOSmtDNAl6srRNA，BOS)、羊線粒體12srRNA基因(OvismtDNAl2srRNA)、豬線粒體NADH5基因(SusNADH5)；和轉基因動物常用的標記基因：新霉素磷酸轉移酶編碼基因(NPTII)、綠色熒光蛋白編碼基因(EGFP)；以及特異的外源轉入基因：人乳鐵蛋白編碼基因(HumanLactoferringene，hLF

6、)、人a礙L清蛋白編碼基因(Humana—Lactalbumingene，haLALBA)基因、人溶菌酶編碼基因(HumanLysozymegene，hLYZ)，應用DNAstar、Primer50、MEGA、DNAMAN、AnnIIyb等生物學軟件比對、篩選設計了8對符合多重PCR的特異性引物和16條特異性基因芯片70mer探針，均具有良好的特異性。通過對該方法擴增條件的優(yōu)化，成功建立多重PCR方法。通過對多重不對稱PCR上下游引物比

7、例的優(yōu)化，雜交體系、雜交條件的優(yōu)化，洗滌條件的優(yōu)化，建立了一種轉基因牛檢測型基因芯片，試驗結果表明針對8種基因的16條特異性探針均得到了較好的雜交結果，特異性強，與轉人防御素3基因奶牛樣品、轉omega3基樣品等均無交叉反應，靈敏度高，檢測極限達lpg，適合轉基因牛的檢測。本研究建立了一種轉基因?；蛐酒瑱z測方法，不僅可以對牛、羊、豬進行動物源性的檢測，還可以篩查轉基因牛樣品，又可以進一步確認轉基因牛外源基因。本研究是對轉基因動物及其產