IL-7拮抗TGF-β1對成纖維細(xì)胞的刺激作用.pdf

1、間質(zhì)性肺疾病是一組發(fā)病機(jī)理不清、治療困難的眾多疾病所組成的纖維化性肺疾病譜，其發(fā)病率和死亡率近幾年逐漸上升。該組疾病大多數(shù)病因不明，但無論肺纖維化的原因如何、發(fā)病機(jī)制如何，肺成纖維細(xì)胞是其共同的最后靶細(xì)胞。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是目前被大多數(shù)學(xué)者公認(rèn)的在多種臟器纖維化形成和發(fā)展中最重要的細(xì)胞因子。而近年來的研究發(fā)現(xiàn)特發(fā)性肺纖維化的病理特征-纖維增殖灶主要由表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的肌成纖維細(xì)胞和膠原等細(xì)胞外質(zhì)基構(gòu)

2、成，而且肌成纖維細(xì)胞是造成細(xì)胞外基質(zhì)異常沉積的主要細(xì)胞。研究已證明TGF-β1在這些過程中起重要作用。近來，研究人員在巨噬細(xì)胞、纖維肉瘤細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了IL-7具有下調(diào)。TGF-β產(chǎn)生的功能。因此，基于TGF-β在肺纖維化發(fā)病中的重要作用，IL-7可能通過下調(diào)TGF-β的產(chǎn)生而具有抗肺纖維化的潛力。 為此，本研究目的是明確IL-7是否能夠下調(diào)TGF-β<,1>刺激后所造成的肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，成纖維細(xì)胞的

3、增殖以及膠原的產(chǎn)生，從而為了解IL-7在抗肺纖維化中所扮演的真實(shí)角色提供線索，為肺纖維化的治療提供一個新手段。 研究對象與方法: 1、材料 細(xì)胞：鼠胚肺成纖維細(xì)胞株(BalB/c3T3，上海中華細(xì)胞庫) 儀器：冰箱、離心機(jī)、分光光度儀、Western印跡器具、恒溫箱、顯微鏡、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)臺等。 試劑： (1)羥脯氨酸檢測試劑盒：南京建成生物研究所。 (2)重組人TGF-β1，重組鼠

4、IL-7：peprotech公司。 (3)單克隆鼠抗α-平滑肌肌動蛋白抗體，武漢博士得生物工程有限公司；山羊抗小鼠二抗，武漢博士得生物工程有限公司。 (4)胎牛血清：購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所。 (5)DMEM培養(yǎng)液，Hyclone公司。 (6)BCA蛋白濃度測定試劑盒：碧云天公司。 2、實(shí)驗(yàn)方法 成纖維細(xì)胞復(fù)蘇后，用濃度10ng/ml TGF-β<,1>刺激，動態(tài)觀察(24、4