金蓮花中葒草苷鋅配合物合成、表征及其生物活性初步研究.pdf

1、現(xiàn)代藥理研究表明，天然藥物有效成分與金屬離子形成的配合物具有更強(qiáng)的藥理活性，其中以黃酮類化合物的研究最為廣泛。葒草苷是中藥金蓮花總黃酮的有效成分單體，屬于黃酮碳苷類，化學(xué)命名為2-(3，4-二羥基苯基)-8-beta-D-吡喃葡萄糖基-5，7-二羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮。葒草苷具有抗炎，抗病毒，體內(nèi)外抗氧化、抗腫瘤作用，對缺血性心肌損傷具有保護(hù)作用。對葒草苷金屬配合物的研究尚未見報(bào)道。本文以葒草苷和乙酸鋅形成葒草苷鋅配合物為研究

2、對象，對其合成工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，采用現(xiàn)代先進(jìn)的技術(shù)鑒定手段進(jìn)行配合物結(jié)構(gòu)表征，對配合物體外抗氧化、抗腫瘤活性進(jìn)行研究。
　　1、葒草苷鋅配合物的合成。以配合物產(chǎn)率為指標(biāo)，單因素考察反應(yīng)pH、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間對配合物產(chǎn)率的影響，正交試驗(yàn)優(yōu)化合成工藝條件。
　　2、葒草苷鋅配合物的結(jié)構(gòu)表征。采用元素分析法、等離子發(fā)射光譜法、紫外光譜法、紅外光譜法、熱重分析法、核磁共振法對葒草苷鋅配合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。
　　3、葒草苷鋅配合

3、物的抗氧化活性選擇。超氧陰離子自由基(·O2-)、羥基自由基(·OH)、DPPH自由基產(chǎn)生體系為實(shí)驗(yàn)體系，考察葒草苷和葒草苷鋅配合物的抗氧化活性。空白對照組加入相應(yīng)的溶劑，樣品組加入不同濃度的葒草苷和葒草苷鋅配合物，用紫外光譜儀檢測各組的吸光度。
　　4、葒草苷鋅配合物的抗腫瘤活性。本文選擇EC-109（食管癌細(xì)胞）和MCF-7（乳腺癌細(xì)胞）腫瘤細(xì)胞為研究對象，采用CCK-8法，經(jīng)過細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代、接種后，空白對照組加入等量

4、的培養(yǎng)液;溶劑對照組加入含DMSO（二甲基亞砜）的培養(yǎng)液，且使DMSO終濃度≤0.2％;實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的葒草苷和葒草苷鋅配合物，濃度分別為5.00，10.00，20.00，40.00，80.00μmol·L-1。作用時(shí)間分別為24h，48h，72h，然后加入CCK-8液，用全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長測定吸光度。
　　結(jié)果表明:
　　1、葒草苷鋅配合物合成工藝:單因素分析表明，葒草苷鋅配合物合成產(chǎn)率受反應(yīng)pH值、

5、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間影響，正交試驗(yàn)優(yōu)化合成工藝的結(jié)果表明，在反應(yīng)pH值為8.5的條件下，65℃回流攪拌8h。洗滌沉淀數(shù)次后于60℃下真空干燥，得到了黃色固體產(chǎn)物，產(chǎn)率為72.64％。
　　2、葒草苷鋅配合物C、H、Zn含量結(jié)果:C、H、Zn元素含量實(shí)驗(yàn)值分別為41.65％，3.21％，14.68％，理論值分別為43.71％，3.30％，16.91％，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與理論推算的數(shù)值基本相符，分析結(jié)果表明，葒草苷與鋅離子可能形成了2∶3的配合

6、物。
　　紫外吸收光譜圖顯示，葒草苷兩個(gè)吸收峰為λmax250nm和350nm，配合物吸收峰為λmax270nm和400nm，發(fā)生了紅移，初步表明形成了葒草苷鋅配合物。由紅外光譜數(shù)據(jù)可知，葒草苷4位羰基振動(dòng)頻率υ(C=O)位于1656cm-1，形成配合物后，該吸收峰向低波數(shù)方向移動(dòng)至1629cm-1，表明4位羰基可能參與了反應(yīng)。葒草苷和葒草苷鋅配合物的醚鍵(C-O-C)分別為1193cm-1，1198cm-1，葡萄糖環(huán)特征峰分別為

7、812cm-1，848 cm-1和808 cm-1，845 cm-1沒有發(fā)生變化，苯環(huán)(C=C)由葒草苷的1613cm-1，變成葒草苷鋅配合物的1565cm-1，表明苯環(huán)(C=C)受到配位的影響，共扼效應(yīng)增強(qiáng)。葒草苷的3385cm-1為分子間羥基締合特征峰，在形成配合物后波數(shù)增加到3422cm-1說明形成配合物后影響了羥基的締合。葒草苷鋅配合物在500cm-1～600cm-1出現(xiàn)吸收峰，為υ O-Zn的振動(dòng)吸收。
　　葒草苷鋅配合

8、物的熱重圖譜表明，配合物不含結(jié)晶水，共有兩個(gè)失重階段。葒草苷鋅配合物第一階段的失重是在120-150℃左右，失重率為5.68％，相當(dāng)于失去4分子的配位水（理論失重率為6.24％），說明葒草苷鋅配合物含有4分子的配位水。第二個(gè)失重階段為260-520℃左右，失重率為73.54％，相當(dāng)于失去2分子葒草苷(理論失重率為76.84％)，得到的殘余物是鋅的氧化物ZnO。
　　葒草苷和葒草苷鋅配合物1H NMR譜圖顯示，葒草苷位于δ13.16

9、(C5-OH),δ10.82(C7-OH),δ10.04(C3'-OH),δ9.06(C4'-OH)處的羥質(zhì)子信號峰在葒草苷鋅配合物中只有δ10.81(C7-OH)存在，表明葒草苷7位羥基質(zhì)子未參與配位，3'，4'，5位的羥基質(zhì)子可能與Zn2+發(fā)生配位。
　　由以上分析可推測葒草苷鋅配合物可能的化學(xué)分子式[Zn3(C21H15O11)2]·4H2O和化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
　　3、葒草苷和葒草苷鋅配合物都具有清除·O2-、·OH、·D

10、PPH的能力，且呈一定的量效關(guān)系。在1.0～8.0μg·ml-1范圍內(nèi)，葒草苷鋅配合物各劑量組在清除·O2-、·OH、·DPPH能力上高于葒草苷配體同等劑量組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、葒草苷和葒草苷鋅配合物都具有抑制EC-109、MCF-7的能力，且呈一定的量效關(guān)系。同一時(shí)相，不同濃度葒草苷和葒草苷鋅配合物均對EC-109、MCF-7細(xì)胞生長增殖抑制率隨著用藥濃度的增高而增高，不同時(shí)相，同一濃度葒草苷和葒草苷鋅配合物均對EC-1

11、09、MCF-7細(xì)胞抑制率隨時(shí)間延長而增加，具有顯著性差異。在不同時(shí)相，相同濃度的葒草苷鋅配合物對EC-109、MCF-7細(xì)胞生長增殖抑制率均高于同濃度的葒草苷。
　　綜上所述，葒草苷與乙酸鋅配位反應(yīng)形成配合物的最佳工藝為:以無水乙醇為溶劑、反應(yīng)pH值為8.5、反應(yīng)溫度為65℃、攪拌時(shí)間8h。得到了葒草苷鋅配合物可能的化學(xué)分子式[Zn3(C21 H15O11)2]·4H2O和化學(xué)結(jié)構(gòu)式（如圖1）。葒草苷鋅配合物在抗氧化和抗腫瘤活性