OA患者滑液和軟骨細(xì)胞中IL-18及相關(guān)因子含量測(cè)定及意義.pdf

1、骨性關(guān)節(jié)炎（Ostearthritis OA）是我國(guó)四大老年病之一，嚴(yán)重影響老年患者的日常生活，但OA的發(fā)病機(jī)制至今尚未明確。目前研究資料顯示，OA的致病過(guò)程中受多方面因素的調(diào)控，涉及多種細(xì)胞因子，并形成網(wǎng)絡(luò)級(jí)聯(lián)系統(tǒng)，導(dǎo)致軟骨基質(zhì)降解和軟骨細(xì)胞凋亡。免疫組化研究顯示，人OA軟骨細(xì)胞較正常軟骨細(xì)胞高表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、白細(xì)胞介素類（Ils）等細(xì)胞因子。白細(xì)胞介素18（Interleukin-18，IL-18）是1995年由Ok

2、amura等從中毒性休克的小鼠肝臟克隆到了一種由應(yīng)激誘生的蛋白，該蛋白是一種分子質(zhì)量為18-19ku的多肽片斷，因?yàn)樵摱嚯哪軌蛘T導(dǎo)輔助性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生干擾素-γ（IFN-γ），還能增強(qiáng)脾T細(xì)胞增殖能力及脾NK細(xì)胞活性，與白細(xì)胞介素12（IL-12）的生物活性極相似，故最初被命名為IFN-γ誘生因子（IFN-γ IGIF）。研究表明，IL-18廣泛存在于關(guān)節(jié)炎患者的滑液，滑膜，半月板和軟骨細(xì)胞中。Gracie在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的滑液和滑膜中測(cè)

3、到的IL-18含量比OA中要高，而OA患者含量又比正常人高。IL-18表達(dá)水平與OA活動(dòng)期關(guān)聯(lián)，提示IL-18可能參與了OA的病因?qū)W環(huán)節(jié)，特別是軟骨基質(zhì)的降解，軟骨細(xì)胞的凋亡和滑膜的炎性病變過(guò)程。IL-18在關(guān)節(jié)滑膜滑液中通過(guò)直接接觸T淋巴細(xì)胞，使單核細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α和IL-1β增加，IL-18誘導(dǎo)產(chǎn)生的IFN-γ在關(guān)節(jié)液中能顯著刺激IL-6，NO，IL-1β，PGE2，而IFN-γ和TNF-α主要誘導(dǎo)各種炎癥疾病包括關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和

4、發(fā)展。Joosten通過(guò)對(duì)關(guān)節(jié)炎滑膜組織中IL-18水平表達(dá)的研究表明，其表達(dá)與IL-1，TNF-α，局部滑膜炎癥程度呈正相關(guān)關(guān)系，且于疾病急性階段相平行，這表明IL-18是關(guān)節(jié)炎病變?cè)缙诘囊环N重要細(xì)胞因子。由于涉及OA病理過(guò)程中的細(xì)胞因子不是通過(guò)單一的途徑發(fā)揮作用的，而是彼此交錯(cuò)，相互影響，形成級(jí)聯(lián)反應(yīng)，因此對(duì)單一或少數(shù)幾個(gè)分子的研究有一定的局限性。Liquichip workstation液相蛋白芯片系統(tǒng)是一種新型的蛋白質(zhì)研究平臺(tái)，

5、可以同時(shí)對(duì)同一樣品中的多個(gè)不同的分子進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，橫向比較這些因子間的關(guān)聯(lián)性，有助于篩選出OA相關(guān)致病因子，采用液體芯片、xMAP（Flexible Multi-Analyte Profiling）技術(shù)進(jìn)行大量因子表達(dá)的測(cè)試以研究白細(xì)胞介素18結(jié)合蛋白對(duì)于其他致病因子表達(dá)的影響，以研究白細(xì)胞介素18和其他因子之間的交互作用，進(jìn)一步了解其在OA致病機(jī)理中的作用機(jī)制。 研究目的: 1.觀察IL-18和PGE2等細(xì)胞因子在OA

6、患者關(guān)節(jié)滑液中表達(dá)的濃度相關(guān)性，認(rèn)識(shí)IL-18與PGE2等細(xì)胞因子在OA發(fā)病機(jī)制中的關(guān)聯(lián)，探索IL-18在OA致病過(guò)程中的作用，進(jìn)一步探索IL-18在OA發(fā)病機(jī)制的分子通路提供線索。 2.認(rèn)識(shí)體外細(xì)胞培養(yǎng)傳代過(guò)程軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化，比較正常軟骨細(xì)胞和OA軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的差異。為進(jìn)一步研究IL-18和細(xì)胞因子在OA及正常軟骨細(xì)胞中的表達(dá)選取合適的培養(yǎng)細(xì)胞，認(rèn)識(shí)軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的去分化現(xiàn)象。 3.觀察這些細(xì)胞因子在正常關(guān)

7、節(jié)軟骨細(xì)胞和OA軟骨細(xì)胞中表達(dá)量的差異同時(shí)觀察IL-18和PGE2等細(xì)胞因子在OA軟骨細(xì)胞上清液中表達(dá)的濃度相關(guān)性，認(rèn)識(shí)IL-18在OA發(fā)病機(jī)制中的可能的分子通路節(jié)點(diǎn)及交互蛋白，探索OA的病因?qū)W。 研究方法: 1.收集OA患者關(guān)節(jié)液，檢測(cè)滑液中細(xì)胞因子的濃度相關(guān)性。取材正常膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和OA患者膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞（需關(guān)節(jié)置換者），體外兩種軟骨細(xì)胞培養(yǎng)，使用酶消化法分離接種軟骨細(xì)胞，并原代培養(yǎng)，使用免疫組織化學(xué)，透射電鏡觀察

8、正常軟骨細(xì)胞與OA軟骨細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的差異，軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)，比較傳代軟骨細(xì)胞之間的形態(tài)學(xué)差異。 2.應(yīng)用liquichip workstation液相蛋白芯片系統(tǒng)檢測(cè)原代培養(yǎng)的OA和正常軟骨細(xì)胞上清液中IL-18和MMP-1，3，9、IL-6，8、TGF-β及VEGF等細(xì)胞因子的濃度，通過(guò)相關(guān)性分析，觀察IL-18與其他細(xì)胞因子的濃度相關(guān)性，篩選出IL-18具有濃度相關(guān)性的細(xì)胞，為進(jìn)一步了解IL-18在OA致病機(jī)制中分子通路環(huán)節(jié)

9、環(huán)節(jié)提供信息。 3.統(tǒng)計(jì)采用SPSS13.0軟件，所測(cè)數(shù)據(jù)以X±S表示，組間比較采用成組t檢驗(yàn)，并對(duì)IL-18和相關(guān)因子之間積差法線性相關(guān)與回歸分析。P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1.OA關(guān)節(jié)滑液和軟骨細(xì)胞中IL-18與PGE2、IL-6和IL-8濃度呈正相關(guān)關(guān)系，提示L-18可能參與關(guān)節(jié)軟骨的基質(zhì)降解和OA炎癥反應(yīng)，IL-18和PGE2等細(xì)胞因子作為參與其中的炎性因子，其分子通路相互交叉，具有密切關(guān)