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文檔簡介
1、近年來血管移植治療下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥被越來越廣泛的應(yīng)用,但是手術(shù)后移植物再狹窄制約了這一手術(shù)開展。研究發(fā)現(xiàn)移植后再狹窄的主要機(jī)制是移植血管內(nèi)膜增生導(dǎo)致血管閉塞,血管內(nèi)膜增生的形成與炎癥、內(nèi)膜白細(xì)胞黏附聚集、平滑肌細(xì)胞遷移和增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)堆積等過程有關(guān),而黏附分子是上述各過程中的重要因子。
目的:本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)移植靜脈動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究,探討大鼠自體靜脈移植內(nèi)膜增生程度和移植動(dòng)物的黏附因子CD11b/CD18表達(dá)之間的關(guān)系,為
2、進(jìn)一步臨床治療提供理論依據(jù)。
方法:建立大鼠自體靜脈移植模型,分為4組,實(shí)驗(yàn)A組(n=24)腹腔注射IL-60.1mg/d,連續(xù)注射28天,實(shí)驗(yàn)B組(n=24)未用任何藥物干預(yù),實(shí)驗(yàn)C組注射CD11/CD18的單克隆抗體0.1mg/d,連續(xù)注射28天,實(shí)驗(yàn)D組(n=24)阿司匹林2mg/d灌胃4周。切取大鼠頸外靜脈4mm,將靜脈移植物移植于頸總動(dòng)脈。在不同時(shí)段切取移植靜脈標(biāo)本,HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察移植靜脈血管管壁厚度、管
3、腔大小和內(nèi)膜增生情況。圖像分析系統(tǒng)分別測(cè)量內(nèi)膜厚度(IT)、中膜厚度(MT)、管腔面積(LA),計(jì)算IT/MT比值。抽取大鼠1ml肝素鈉抗凝的靜脈血,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)有CD11/CD18表達(dá)的細(xì)胞數(shù)目。免疫組織化學(xué)分析采用S2P法, DAB顯色,計(jì)算動(dòng)脈內(nèi)膜及中膜內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞中陽性染色標(biāo)記物的數(shù)目。
結(jié)果:流式細(xì)胞儀分析顯示有CD11b/CD18表達(dá)的細(xì)胞數(shù)目變化:A、B、D組的有CD11b/CD18表達(dá)的細(xì)
4、胞數(shù)在移植術(shù)后2周內(nèi)隨時(shí)間逐漸升高,2周左右增加幅度明顯。各組血標(biāo)本用流式細(xì)胞儀測(cè)量發(fā)現(xiàn):C組與A組比較,C組表達(dá)CD11/CD18的細(xì)胞數(shù)有顯著降低(P>0.05);B組與C組相比較,表達(dá)CD11/CD18的細(xì)胞數(shù)明顯升高,不同的治療組治療有顯著性差異(P>0.05)。移植靜脈病理組織學(xué)分析HE染色后,光學(xué)顯微鏡下觀察,與正常移植頸靜脈和相比較,移植血管在術(shù)后3天開始發(fā)生內(nèi)膜增生,1周后開始出現(xiàn)內(nèi)膜增生,C組增生的平滑肌細(xì)胞層數(shù)明顯少
5、于A組,而A組平滑肌細(xì)胞增生的層數(shù)明顯多于C組,導(dǎo)致移植靜脈管腔明顯狹窄。術(shù)后各組的IT/MT、IA/MA的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).免疫組化DAB染色結(jié)果顯示:各組大鼠移植靜脈內(nèi)均可見有陽性表達(dá),各組隨著時(shí)間的推移而增多,2周內(nèi)達(dá)高峰,隨后CD11b/CD18表達(dá)趨于穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)組增厚的動(dòng)脈內(nèi)膜及中膜的各層細(xì)胞內(nèi)可見大量CD11/CD18棕黃色PCNA顆粒狀陽性染色物質(zhì),部分融合成片,CD11b/CD18單克隆抗體組CD11b/
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