腺病毒載體對大鼠移植靜脈影響的實驗研究.pdf

1、本文擬行動物實驗探討腺病毒載體轉染后的對移植靜脈的影響。 研究方法： 選用wistar大鼠162只，隨機分成三組，每組54只，實驗組(手術，腺病毒處理移植血管)，對照組(手術)，正常對照組(非手術)，手術組按時間再分成術后3天、10天、30天組。模擬臨床上自體靜脈移植術，通過問置移植wistar大鼠頸靜脈的分支頭靜脈于同側頸總動脈，實驗組應用腺病毒液浸泡20分鐘后間置移植。術后移植靜脈行HE染色和Verhoeff-Van

2、Gieson染色，用計算機圖象分析儀觀察血管內(nèi)膜，測量平均厚度。應用SABC法增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組織化學染色，觀察血管內(nèi)膜平滑肌細胞內(nèi)PCNA表達及血管平滑肌細胞增殖的情況。標本先給予微波抗原修復，PCNA染色，定位于細胞核內(nèi)，陽性細胞核染色為棕褐、棕黃、淺黃色。以陽性細胞為分子計算PCNA表達指數(shù)并用百分比表示。取材的血管于倒置熒光顯微鏡，以紫外光激發(fā)觀察測定腺病毒載體(AdS-GFP)轉染率。半定量逆轉錄一聚合酶鏈反應(

3、RT-PCR)及Western蛋白印跡檢測ICAM-1、VCAM-1水平。實驗數(shù)據(jù)用SPSS軟件包進行數(shù)據(jù)分析處理，均以P<0.05為有顯著性差異。 研究結果： 1、腺病毒載體(Ad5-GFP)轉染率的測定結果：術后3天，GFP表達較高，26.4±3.6％；術后10天，GFP表達有所下降，14.5±2.1％；術后30天，GFP幾乎沒有表達，0.81±0.2％。 2、移植術后10天實驗組及對照組可見明顯內(nèi)膜增生。移

4、植術后30天實驗組及對照組內(nèi)膜增生減輕。實驗組及對照組與正常非移植靜脈相比，內(nèi)膜增生明顯(P<0.05)，實驗組較對照組內(nèi)膜增生稍明顯，但統(tǒng)計學無差異。 3、實驗中正常靜脈平滑肌細胞PCNA陽性細胞極少，對照組與實驗組術后10天，內(nèi)膜與中膜SMC的PCNA陽性細胞增多，增殖達到高峰。術后30天中膜SMC的PCNA陽性細胞明顯減少。實驗組及對照組與正常非移植靜脈相比，PCNA陽性細胞增高明顯(P<0.05)。實驗組較對照組PCNA

5、陽性細胞稍多，但統(tǒng)計學無差異。 4、RT-PCR和Westemblot結果正常靜脈ICAM-1 mRNA、VCAM-1mRNA和蛋白表達很少，對照組移植后3天部分細胞即出現(xiàn)陽性表達，10天表達最強，30天仍較高。與正常靜脈組有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。實驗組較對照組表達更高，但與對照組無統(tǒng)計學差異。 研究結論： 1、腺病毒載體能高效的進行體內(nèi)基因轉移，作用時間短暫。腺病毒載體導致移植靜脈的血管內(nèi)SMC活化、增多