重組人5型腺病毒聯(lián)合RNA干擾治療惡性腫瘤的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文重組人5型腺病毒聯(lián)合RNA干擾治療惡性腫瘤的研究姓名：王麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：錢關(guān)祥;盧健20080501上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士論文第一部分H 1 0 1 對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖抑制和殺傷作用選取人脈絡(luò)膜惡性黑色素瘤細(xì)胞株O C M l 、V U P 、S P 6 ．5 和0 M 4 3 1 作為實(shí)驗(yàn)材料，檢測(cè)這四株細(xì)胞中柯薩奇一腺病毒受體( C o x s a k i e v i

2、 r u s a n dA d e n o v i r u s R e c e p t o r ，C A R )的表達(dá)情況；評(píng)價(jià)H I O I 對(duì)該腫瘤細(xì)胞的增殖抑制和殺傷作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，0 C M l 、V U P 、S P 6 ．5 和o M 4 3 l 四株細(xì)胞均有C A R 受體的表達(dá)；H 1 0 1 對(duì)四株細(xì)胞均有增殖抑制和殺傷作用，且增殖抑制和殺傷作用呈時(shí)間和劑量應(yīng)答，但四株細(xì)胞對(duì)H 1 0 1 的敏感性不盡相同。第二部

3、分H I O I 聯(lián)合R N A 干擾阻斷N o t c h 途徑對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響本部分研究通過H 1 0 1 聯(lián)合R N A 干擾的方法，應(yīng)用針對(duì)N o t c h 蛋白的N o t c h l - s i R N A來阻斷N o t c h 信號(hào)通路，擬發(fā)現(xiàn)N o t c h 和這些腫瘤之間的關(guān)系，包括單獨(dú)應(yīng)用H 1 0 1 以及和N o t c h l 一s i R N A 聯(lián)合應(yīng)用，觀察兩種方法對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制和殺傷作用。選取

4、瘤內(nèi)單獨(dú)注射H 1 0 1 和裸N o t c h l - s i R N A 以及兩者聯(lián)合應(yīng)用，以評(píng)價(jià)對(duì)H I O I 和N o t c h l —S i R N A聯(lián)合應(yīng)用對(duì)H e l a - S 3 細(xì)胞致瘤的裸鼠的療效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示： N o t c h l —S i R N A 能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)N o t c h 信號(hào)的下調(diào)，并使腫瘤細(xì)胞增殖受到抑制：H 1 0 1 和N o t c h l - s i R N A 聯(lián)合應(yīng)用，在體

5、外對(duì)H e l a —S 3 和V U P 等細(xì)胞增殖抑制顯示協(xié)同作用，并且能在體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)、顯著延長(zhǎng)荷瘤裸鼠的生存時(shí)間。第三部分H 1 0 1 聯(lián)合R N A 干擾( R N A i ) N o t c h 基因抑制腫瘤生長(zhǎng)機(jī)制的探討本部分研究采用H I O I 聯(lián)合N o t c h l - s i R N A 方法阻斷N o t c h 信號(hào)通路，觀察這一聯(lián)合作用對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響及其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用；觀察通過R N