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文檔簡介
1、本研究擬從監(jiān)測鼻咽癌患者治療前后血清中。TGF-β1的表達(dá)水平入手,分析TGF-β1與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系;再進(jìn)一步檢測TGF-β1及其信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子,包括TGF-β1及其兩個受體TβRI、TβR Ⅱ和此信號通路下游關(guān)鍵分子Smad4,在鼻咽癌病理組織中的表達(dá)情況,進(jìn)一步分析鼻咽癌病理組織中TGF-β1及其信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系;然后在鼻咽癌細(xì)胞株中通過檢測,篩選出能完全表達(dá)TGF-
2、β1及其信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子的鼻咽癌細(xì)胞株,為進(jìn)一步的體外研究尋找合適的研究對象;最后利用外源性TGF-β1作用于已經(jīng)篩選出的鼻咽癌細(xì)胞株,觀察TGF-β/Smad信號通路對鼻咽癌生長、分化及凋亡等方面的影響,從而明確TGF-β/Smad信號通路對鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制。本研究預(yù)期為鼻咽癌患者制定合理的分層治療方案提供可靠的理論依據(jù),并為以基因為靶點的治療手段的研究提供新的策略和途徑。 第一部分 鼻咽癌患者血清中TGF-
3、β1的檢測及其臨床意義 目的: 檢測TGF-β1在鼻咽癌患者血清中的表達(dá)水平,進(jìn)一步分析它與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。 方法: 采用ELISA實驗方法檢測156例鼻咽癌患者血清中的TGF-β1表達(dá)水平,應(yīng)用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)論: 鼻咽癌患者治療前血清中的TGF-β1濃度明顯高于正常人,而且患者治療前血清中TGF-β1濃度明顯高于治療后,治療前血清中TGF-β1
4、濃度與頸淋巴結(jié)N分期、92’臨床分期和治療后有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)性具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義,TGF-β1高濃度組3年總生存率、3年無進(jìn)展生存率、3年無復(fù)發(fā)生存率及3年無轉(zhuǎn)移生存率均較低濃度組差,高濃度TGF-β1是鼻咽癌患者總生存率、無進(jìn)展生存率及無轉(zhuǎn)移生存率的不良預(yù)后因素,說明血清中TGF-β1濃度可能成為診斷和預(yù)測鼻咽癌預(yù)后的分子指標(biāo)。 第二部分 TGF-β1及其信號通路分子在鼻咽癌組織中的表達(dá)及其臨床意義 目的:
5、 檢測TGF-β1及其信號通路關(guān)鍵分子(TβR Ⅰ、TβR Ⅱ和Smad4)在鼻咽癌組織中的表達(dá)水平,探討其與鼻咽癌臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。 方法: 采用免疫組化方法檢測91例鼻咽癌患者TGF—β1及其兩個受體TβR Ⅰ、TβR Ⅱ和此信號通路下游分子Smad4在組織中的表達(dá)情況,分析它們與鼻咽癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)論: 在鼻咽癌組織中,TGF-β1表達(dá)陽性患者較陰性患者5年總生存率、5年無進(jìn)
6、展生存率、5年無復(fù)發(fā)生存率及5年無轉(zhuǎn)移生存率均明顯下降,說明TGF-β1陽性表達(dá)者易發(fā)生局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,并導(dǎo)致生存率明顯降低,表明TGF-β1對鼻咽癌患者的預(yù)后發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,可能是通過TGF-β1對腫瘤的抑制作用減弱或者其腫瘤促進(jìn)作用的增強(qiáng)。多因素Cox回歸模型判斷預(yù)后因素,結(jié)果顯示TGF-β1可能是無復(fù)發(fā)生存的獨立預(yù)后因素。 第三部分 外源性TGF-β1調(diào)控鼻咽癌細(xì)胞株生長、分化及凋亡的實驗研究 目的:
7、 篩選可以應(yīng)用于體外研究的完全表達(dá)TGF-β1信號通路的鼻咽癌細(xì)胞株、觀察外源性TGF-β1對此細(xì)胞株生長、分化及凋亡等的影響情況,初步分析得出TGF-β1對鼻咽癌的體外作用機(jī)制,為進(jìn)一步研究其體內(nèi)作用機(jī)制提供可以參考的依據(jù)。 方法: 以鼻咽高分化鱗癌CNE-1和鼻咽低分化鱗癌CNE-2細(xì)胞株為研究對象,采用免疫組化技術(shù)對鼻咽癌細(xì)胞株進(jìn)行染色,篩選出可以應(yīng)用于體外研究的完全表達(dá)TGF-β1信號通路的鼻咽癌細(xì)胞株為進(jìn)
8、一步研究對象。用MTT法檢測外源性TGF-β1對細(xì)胞生長的影響情況,用流式細(xì)胞儀檢測外源性TGF-β1對鼻咽低分化癌CNE-2細(xì)胞株細(xì)胞周期和凋亡的影響,用熒光顯微鏡檢測外源性TGF-β1誘導(dǎo)鼻咽低分化癌CNE-2細(xì)胞株凋亡的情況。 結(jié)論: 鼻咽低分化癌CNE-2細(xì)胞株存在TGF-β1自分泌現(xiàn)象,且TGF-β1信號傳導(dǎo)通路中各關(guān)鍵分子在CNE-2細(xì)胞株中均有表達(dá),這說明可以應(yīng)用鼻咽低分化癌CNE-2細(xì)胞株進(jìn)行該信號通路的
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