Ezrin促進食管癌細胞移動等腫瘤生物學行為的研究.pdf

1、Ezrin屬于ERM家族，是細胞膜蛋白與細胞微絲骨架之間的連接者，在維持細胞形態(tài)和調控細胞內外信號轉導等過程中發(fā)揮著十分重要的功能。本課題組以往曾研究發(fā)現(xiàn)，在永生化食管上皮細胞的惡性轉化中，Ezrin顯著異常過表達，敲降ezrin基因表達可以有效抑制食管癌細胞的移動侵襲能力。而臨床食管癌組織檢測結果表明，Ezrin的過表達與患者的生存率呈顯著負相關關系；說明Ezrin具有警示食管癌預后的作用，是重要的分子標志物。
　　 在上述研

2、究基礎之上，本論文擬通過突變關鍵氨基酸殘基位點，即567上的蘇氨酸，結合反義封閉實驗，進一步深入探討了Ezrin促進食管癌細胞移動的分子機制。
　　 首先，將ezrin的三種突變質粒，包括pEGFP-N1-ezrin-T/A（T567A）、pEGFP-N1-ezrin-T/D（T567D）、pEGFP-N1-ezrin-Nter（N端截斷型，309aa），以及pEGFP-N1-ezrin-wt（野生型）分別轉染食管癌細胞EC10

3、9，進而檢測上述各組細胞的移動能力的變化。結果發(fā)現(xiàn)，與轉染空載體（pEGFP-N1）的對照組細胞比較，1）轉染pEGFP-N1-ezrin-T/D質粒的食管癌細胞的移動能力顯著增強；2）轉染pEGFP-N1-ezrin- T/A和pEGFP-N1-ezrin-wt的食管癌細胞的移動能力均未見明顯變化；3）而轉染pEGFP-N1-ezrin-Nter的食管癌細胞的移動能力顯著下降。這說明567蘇氨酸殘基位點對于Ezrin促進食管癌細胞移動

4、能力至關重要，可能與該位點的磷酸化修飾相關。
　　 其次，檢測上述各組細胞的增殖能力的變化。結果發(fā)現(xiàn)，與轉染空載體（pEGFP-N1）的對照組細胞比較，1）轉染pEGFP-N1-ezrin-T/D的食管癌細胞的增殖能力有明顯增強，2）分別轉染pEGFP-N1-ezrin-T/A、pEGFP-N1-ezrin-Nter和pEGFP-N1-ezrin-wt的食管癌細胞的增殖能力未見明顯改變。
　　 最后，檢測上述各組細胞的細

5、胞周期。結果發(fā)現(xiàn)，與轉染空載體（pEGFP-N1）的對照組細胞比較，轉染pEGFP-N1-ezrin-T/A和pEGFP-N1-ezrin-Nter的食管癌細胞被阻滯在G1期，轉染轉染pEGFP-N1-ezrin- wt的食管癌細胞被阻滯在S期，轉染轉染pEGFP-N1-ezrin-T/D的食管癌細胞被阻滯在G2/M期。
　　 綜上所述可見，Ezrin促進食管癌細胞移動作用的呈現(xiàn)與其C端567位點上的蘇氨酸關系密切，而且還可能涉