大劑量甲氨蝶呤分別聯(lián)合順鉑、表阿霉素抑制MG-63骨肉瘤細胞效果的比較.pdf

1、目的：大劑量甲氨蝶呤（High dose methotrexate,HDMTX）與順鉑（Cisplatin，DDP）聯(lián)用是治療骨肉瘤有效的方案之一。通過比較HDMTX聯(lián)用DDP與HDMTX聯(lián)用表阿霉素（Epirubicine,EPI）對MG－63人骨肉瘤細胞的毒性作用，判斷后者是否也能達到較好的效果。 方法：實驗分別用HDMTX、DDP、EPI單藥和HDMTX＋DDP、HDMTX＋EPI雙藥作用于MG-63骨肉瘤細胞，誘導(dǎo)其調(diào)亡

2、和壞死。根據(jù)藥物的血峰濃度（peak serum concentration，PSC）共設(shè)計10個實驗組：⑴MTX 100PSC（HDMTX）；⑵DDP PSC；⑶DDP 10PSC；⑷EPI PSC；⑸EPI 10PSC；⑹HDMTX＋EPI PSC；⑺HDMTX +EPI 10PSC；⑻HDMTX+DDP PSC；⑼HDMTX+DDP 10PSC；⑽不加藥對照組。利用光學(xué)顯微鏡觀察不同藥物組作用之后細胞的一般形態(tài)變化；通過M

3、TT比色實驗檢測細胞對不同藥物組的藥物敏感性，計算其活性抑制率：抑制率（％）=（1－加藥組平均OD值/對照組平均OD值）×100％；通過BrdU標(biāo)記酶聯(lián)免疫吸附方法檢測不同藥物組對細胞增殖能力的影響，計算各組的增殖抑制率，抑制率％=（1－試驗組OD平均值/對照組OD平均值）×100％；用流式細胞儀檢測不同藥物組作用之后細胞的調(diào)亡率。上述實驗最終結(jié)果均用金氏公式：Q=Ea+b/(Ea + Eb – Ea×Eb)分析判斷合并用藥后的效應(yīng)并與

4、單藥組做比較，在細胞學(xué)水平上初步比較HDMTX聯(lián)用DDP與聯(lián)用EPI對MG－63骨肉瘤細胞毒性作用的差異。 結(jié)果：加入藥物作用于MG-63細胞24小時后觀察：光鏡下可見對照組細胞呈長梭形或三角形，細胞結(jié)構(gòu)清晰，貼壁牢；實驗組細胞皺縮成圓形，細胞結(jié)構(gòu)模糊，懸浮于培養(yǎng)液中，且藥物高濃度組和兩藥聯(lián)用組其細胞變小、變圓、漂浮的比例明顯增多；HDMTX＋EPI組比HDMTX＋DDP組的變化更明顯；MTT比色實驗顯示HDMTX分別與DDP、

5、EPI聯(lián)用時對細胞活力的抑制都有協(xié)同作用（Q值＞0.85）。HDMTX +EPI組比HDMTX +DDP組對MG-63細胞活力的抑制作用更強（低濃度組44.65±1.5％ vs 26.56±1.8％，p＜0.01；高濃度組72.96±0.7％ vs 58.98±0.6％，p＜0.01），；BrdU標(biāo)記法的結(jié)果顯示HDMTX和DDP聯(lián)用對MG-63細胞增殖能力的影響為協(xié)同（Q值＞0.85），雖然HDMTX與EPI聯(lián)用后作用發(fā)生拮抗（Q值＜

6、0.85），但是仍然能獲得較高的抑制率（69.65±2.9％，80.99±2.0％）；流式細胞儀檢測的結(jié)果顯示HDMTX和DDP聯(lián)用與和EPI聯(lián)用在誘導(dǎo)細胞調(diào)亡方面都有協(xié)同作用（Q值＞0.85），結(jié)果與MTT比色實驗的一致。 結(jié)論：體外實驗顯示，在對MG-63骨肉瘤細胞活力抑制和誘導(dǎo)調(diào)亡方面HDMTX與EPI或DDP聯(lián)用都有協(xié)同作用；在對抑制MG-63細胞增殖能力方面HDMTX與EPI聯(lián)用后作用雖然為拮抗，但仍可達到較高的抑制率