白血病患者SHP-1與JAK1基因的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：SHP-1基因是含SH<,2>結(jié)構(gòu)域的磷酸酶，為近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的主要表達(dá)于造血細(xì)胞的候選抑癌基因，通過(guò)對(duì)下游信號(hào)蛋白分子磷酸酪氨酸脫磷酸化而終止、消弱細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)或激活凋亡信號(hào)負(fù)調(diào)控造血細(xì)胞的分化、發(fā)育和增殖。SHP-1是JAK/STAT信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子之一，有研究表明白血病細(xì)胞系中SHP-1表達(dá)降低或缺如。JAK/STAT信號(hào)通路是為多種造血生長(zhǎng)因子應(yīng)用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在造血細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，J

2、AK/STAT信號(hào)通路的組成性激活已成為白血病的普遍特征。本研究旨在觀察SHP-1、JAK1基因mRNA在不同類型、不同分期白血病中表達(dá)水平的差異，及白血病治療前后SHP-1、JAKlmRAN表達(dá)水平的變化，初步探討SHP-1基因在白血病形成中對(duì)JAK/STAT信號(hào)通路的影響及對(duì)白血病預(yù)后的判斷價(jià)值，闡明SHP-1基因在白血病形成中的作用及可能的機(jī)制，為進(jìn)一步探索白血病發(fā)生的病理機(jī)制、開(kāi)發(fā)新的靶向治療策略提供理論依據(jù)。 方法：采

3、用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的方法檢測(cè)急性白血病患者(AL)(急性髓細(xì)胞白血病AML和急性淋巴細(xì)胞白血病ALL)、慢性髓細(xì)胞白血病慢性期(CML-CP)、加速或急變期患者(CML-Ap或CML-BP)、初次誘導(dǎo)緩解治療完全緩解者及正常對(duì)照(NC)者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中SHP-1和JAK1mRNA表達(dá)情況，比較各組中SHP-1和JAK1mRNA豐度的差異，并觀察SHP-1和JAK1mRNA水平與初次誘導(dǎo)緩解治療完全緩解率的關(guān)系。 結(jié)果：

4、 1 半定量RT-PCR檢測(cè)SHP-1mRNA的相對(duì)表達(dá)。 1.1 80例初治AL組中，SHP-1mRNA的陽(yáng)性率為33.75％(27/80)，表達(dá)相對(duì)水平范圍為0-1.629，平均水平為0.082，NC組SHP-1mRNA陽(yáng)性率100％，表達(dá)相對(duì)水平范圍為0.132-4.285，平均水平為1.924，高于初治AL患者，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-7.222，P=0.000。 1.2 AL復(fù)發(fā)組13例中僅1例SHP-

5、1mRNA陽(yáng)性，表達(dá)水平為0.002，與NC組(1.924)比較明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=4.899，P=0.000。較初治AL組表達(dá)水平低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=2.426，P=0.015。 1.3 56例初次誘導(dǎo)緩解治療CR組中，SHP-1mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為57.14％(321/56)，相對(duì)表達(dá)水平范圍為0-3.273，平均水平為0.381，與NC組(1.924)相比表達(dá)水平降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-4.415，P=0.

6、000；與初診時(shí)自身對(duì)照相比(表達(dá)相對(duì)水平范圍為0-0.924，平均水平為0.095)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，z=-2.148，P=0.032。 1.4 11例CML-CP組中SHP-1mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為54.55％(6/11)，相對(duì)表達(dá)水平范圍0-0.969，平均水平0.356，CML-AP或CML.BP組SHP-1mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率20.00％(2/10)，表達(dá)相對(duì)水平范圍0-0.037，平均水平0.007，低于CML-CP

7、組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-2.358，P=0.041。CML-CP組較初治AL組SHP-1mRNA表達(dá)相對(duì)豐度高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-2.171，P=O.030。CML-CP組較NC組SHP-1mRNA表達(dá)相對(duì)豐度低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-4.350，P=0.000。比較CML-AP或CML-BP組與初治AL組SHP-1mRNA表達(dá)相對(duì)水平，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-1.068，P=0.286。 2 半定量RT-PCR檢測(cè)JAK1mRN

8、A的相對(duì)表達(dá)。白血病患者及NC組均陽(yáng)性表達(dá)。 2.1初治AL組，JAK1mRNA表達(dá)相對(duì)豐度范圍為0.106-2.226，平均表達(dá)水平為0.595，高于NC組表達(dá)相對(duì)豐度范圍為0.075-0.911，平均表達(dá)水平為0.390，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-1.948，P=0.051。 2.2在復(fù)發(fā)的13例AL患者中，JAK1mRNA表達(dá)相對(duì)豐度范圍為0.203-1.453，平均表達(dá)水平為0.599，高于NC組(0.390)，有統(tǒng)

9、計(jì)學(xué)意義，z=-1.990，P=0.047。復(fù)發(fā)AL組(0.599)較初治AL組(0.595)JAKlmRNA表達(dá)相對(duì)豐度高，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-1.947，P=0.052。 2.3 56例初次誘導(dǎo)緩解治療CR組中，CR后JAKlmRNA的表達(dá)相對(duì)豐度范圍為0.129-0.978，平均水平為0.503，高于NC組(0.390)，Z=-1.546，P=0.122，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；初診時(shí)JAKlmRNA表達(dá)相對(duì)豐度范圍為0.158-2

10、.226，平均水平為0.596，CR組化療前后自身對(duì)照無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-1.062，P=0.288。 2.4 11例CML-CP患者JAKlmRNA表達(dá)相對(duì)豐度范圍為0.163-0.978，平均水平為0.483，與NC組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-0.413，P=0.680；CML-CP組較初治AL組(0.595)豐度低，但亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-0.461，P=0.645。CML-AP或CML-BP組JAK1mRNA表達(dá)相對(duì)豐度

11、范圍為0.160-1.277，平均水平為0.612，較CML-CP組表達(dá)水平高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意，Z=-0.986，P=0.324；較NC組表達(dá)豐度低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-2.068，P=0.039。 3 AL患者SHP-1、JAKl mRNA表達(dá)水平呈輕度負(fù)相關(guān)，Z=-1.982，P=0.048。 4 SHP-1mRNA表達(dá)水平與急性白血病FAB分型。 4.1 初治AML患者SHP-1mRNA的表達(dá)陽(yáng)性率為3

12、8.57％(22/57)，表達(dá)相對(duì)水平范圍為0-1.629，平均水平為0.112；初治ALL患者SHP-1mRNA表達(dá)陽(yáng)性率為21.739％(5/23)，表達(dá)相對(duì)水平范圍為0-0.101，表達(dá)水平0.005。比較兩組表達(dá)陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，x<'2>=4.738，P=0.030；初治AML組SHP-1mRNA表達(dá)相對(duì)水平高于初治ALL組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Z=-1.975，P=0.048。 4.2 SHP-1mRNA在初治AML各

13、EAB亞型表達(dá)情況為，M1：陽(yáng)性率2/3，表達(dá)相對(duì)水平范圍為O-0.042，平均水平為0.04；M2：陽(yáng)性率7/23，表達(dá)相對(duì)水平范圍O-1.629，平均水平0.120；M3：陽(yáng)性率6/14，表達(dá)相對(duì)水平范圍O-0.736，平均水平0.114；M4：陽(yáng)性率1/7，表達(dá)相對(duì)水平范圍O-0.012，平均水平0.001；M5：陽(yáng)性率2/8，表達(dá)相對(duì)水平范圍O-0.924，平均水平0.117；M6：陽(yáng)性率1/1，表達(dá)相對(duì)水平水平0.002；M7

14、：陽(yáng)性率1/1，表達(dá)相對(duì)水平水平0.209。由于M1、M6、M7病例數(shù)量較少未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，初治M2-M5患者SHP-1mRNA表達(dá)相對(duì)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，h=0.09，P=0.756。 5 SHP-1mRNA表達(dá)水平與化療療效。 5.1 80例初治AL患者中SHP-1<'+>組CR率為88.89％(24/27)，SHP-1<'->組CR率為60.38％(32/53)。SHP-1<'->組的CR率低于sHP-1<'+

15、>組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，x<'2>=5.644，P=0.018。 5.2初次誘導(dǎo)緩解治療后完全緩解組初診時(shí)SHP-1InRNA表達(dá)相對(duì)水平范圍為0-1.63，平均水平為0.111，陽(yáng)性表達(dá)率為41.071％(23/56)；未完全緩解組SHP-1mRNA表達(dá)相對(duì)水平范圍為0-0.16，平均水平為0.0128，陽(yáng)性表達(dá)率為16.667％(4/24)。兩組表達(dá)水平比較，Z=-2.244，P=0.025；兩組表達(dá)陽(yáng)性率比較，x<'2>

16、=9.931,P=0.002，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1 白血病患者SHP-1mRNA表達(dá)降低或缺如，說(shuō)明SHP-1與白血病發(fā)生有關(guān)；白血病形成中可能存在JAK1mRNA表達(dá)的異常增高。 2 CML患者在CML-AP或CML-BP的SHP-1mRNA豐度較CML.CP明顯降低，檢測(cè)SHP-1mRNA可做為CML分期的參考指標(biāo)。 3 SHP-1mRNA表達(dá)水平與白血病FAB分型相關(guān)，在初治AML患者較

17、ALL患者表達(dá)水平和陽(yáng)性率高，可做為AL患者FAB分型的參考因素。 4 SHP-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)的初治AL患者的初次誘導(dǎo)緩解治療完全緩解率明顯高于陰性表達(dá)組，是初治AL患者預(yù)后良好的指標(biāo)。CR后SHP-1mRNA上升，復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)再次降低，表明SHP-1與AL療效預(yù)后及疾病的進(jìn)展有關(guān)，可用來(lái)作為判斷療效預(yù)后和疾病惡性程度的標(biāo)志。 5 SHP-1是候選的白血病抑制基因，與白血病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸有關(guān)，SHP-1mRNA與JA