藍(lán)光照射致人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡與Ca2+-PKC信號(hào)通路的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討藍(lán)光照射誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，研究在此過(guò)程中Ca2+-PKC信號(hào)通路所起的作用。
　　 方法：分別用不同濃度的蛋白激酶C(protein kinase C)激動(dòng)劑PMA和抑制劑Calphostin C預(yù)處理體外培養(yǎng)的第四代人RPE細(xì)胞；用Western bloting法檢測(cè)PKC蛋白表達(dá)，確定PMA與Calphostin C影響PKC活性

2、的最適宜濃度。將體外培養(yǎng)的第四代人RPE細(xì)胞隨機(jī)分為2組：A組：藍(lán)光光照組，用(2000±500)Lux藍(lán)光照射6h，終止培養(yǎng)24h；B組：無(wú)光照組。用非放射性核素法測(cè)定無(wú)光照組與藍(lán)光光照組PKC活性變化。將體外培養(yǎng)的第四代人RPE細(xì)胞隨機(jī)分為5個(gè)干預(yù)組：A組：無(wú)光照組：B組：?jiǎn)渭兯{(lán)光光照組；C組：藍(lán)光+硝苯地平組；D組：藍(lán)光+CalphostinC組；E組：藍(lán)光+PMA組；用Fluo-3 AM標(biāo)記人RPE細(xì)胞，用激光共聚焦顯微鏡(LS

3、CM)測(cè)定各組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度。
　　 結(jié)果：(1)PMA組：100nmol/L組和200nmol/L組PKC活性均高于其它各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000)，100nmol/L組與200nmol/L組相比PKC活性無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.072)；Calphostin C組：100nmol/L組和200nmol/L組P

4、KC活性均低于其它各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000)，100nmol/L組與200nmol/L組相比PKC活性無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.385)。(2)藍(lán)光光照組PKC活性高于無(wú)光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(T=8.136，P=0.015)。(3)藍(lán)光光照組、藍(lán)光+硝苯地平組、藍(lán)光+Calphostin C組和藍(lán)光+PMA組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒

5、光強(qiáng)度值均高于無(wú)光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.000，0.000，0.000)；藍(lán)光+硝苯地平組、藍(lán)光+Calphostin C組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值均低于藍(lán)光光照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000，0.000)；藍(lán)光+硝苯地平組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值低于藍(lán)光+Calphostin C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)；藍(lán)光+Calphostin C組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值低于藍(lán)光+PMA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義(P=0.000)；藍(lán)光光照組細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度值低于藍(lán)光+PMA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　 結(jié)論：(1)PMA和Calphostin C影響PKC活性的最適宜濃度均為100nmol/L；(2)藍(lán)光照射后人RPE細(xì)胞內(nèi)PKC活性增高；(3)藍(lán)光照射后人RPE細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高，胞內(nèi)增高的鈣離子可能來(lái)源于鈣通道及Ca2+-PKC信號(hào)通路；鈣通道抑制劑硝苯地平和PKC抑制劑Calphostin C均能使藍(lán)