水蛭提取液對牛視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、　　目的：觀察水蛭提取液對凝血酶誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖的影響，并進(jìn)一步研究水蛭提取液對視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。從而探討中藥水蛭用于防治PVR的作用機(jī)制。 方法：(1)采用消化培養(yǎng)法，對牛視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。(2)采用不同濃度的凝血酶，利用牛第3代RPE細(xì)胞，作用24小時(shí)后以MTT法測定OD值，篩選出最佳藥物濃度。(3)選擇128mg/ml中藥水蛭提取液和0.5NIHU/ml凝血酶，采用三種加

2、藥方式(中藥和凝血酶同時(shí)加、先加凝血酶后加中藥、先加中藥后加凝血酶)，選取20分鐘時(shí)間點(diǎn)，觀察牛第3代RPE細(xì)胞生長狀態(tài)，并以MTT法測定OD值。(4)選取20分鐘時(shí)間點(diǎn)，采用3種加藥方式，分別測定細(xì)胞內(nèi)PKC活性、細(xì)胞內(nèi)每毫克蛋白質(zhì)催化產(chǎn)生的cAMP量和細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子含量?！　〗Y(jié)論：(1)水蛭滲濾液有抑制凝血酶誘導(dǎo)的牛RPE細(xì)胞增殖的作用。(2)水蛭滲濾液抑制凝血酶誘導(dǎo)的牛RPE細(xì)胞增殖與G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有一定關(guān)系。(3)水蛭滲濾液