褪黑激素對(duì)于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞線粒體途徑凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、由凋亡導(dǎo)致的視功能損傷是眼科臨床常見的一種病理過程，因此尋找安全、有效的抗凋亡方法始終是眼科醫(yī)師所關(guān)注的問題。已有證據(jù)顯示褪黑激素（melatonin，MLT）具有高效廣譜的抗氧化抗凋亡作用，本課題將在眼科領(lǐng)域?qū)λ倪@一作用展開研究。 目的: 研究體外視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithilial ,RPE）細(xì)胞凋亡模型中，各線粒體凋亡途徑指標(biāo)（細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive oxygen spec

2、ies ,ROS）、線粒體DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）、細(xì)胞色素C（Cytochrome C）和線粒體超微結(jié)構(gòu)）的變化，以及它們?cè)诩?xì)胞凋亡中所起的作用；評(píng)價(jià)褪黑激素的細(xì)胞線粒體保護(hù)和抗凋亡作用。 方法: 以過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)建立體外RPE細(xì)胞凋亡模型；通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生與定位（H2DCFDA和MTR雙標(biāo)記法）、mtDNA的完整性（PCR法）、Cytochrome C在線粒體與胞

3、質(zhì)中的含量（蛋白印跡法）和細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)的變化（電鏡觀察）這些指標(biāo)來分析凋亡模型中細(xì)胞線粒體的功能狀況；通過流式細(xì)胞+PI染色、TUNEL+PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡；并且分析線粒體指標(biāo)和凋亡的關(guān)系；然后觀察在不同劑量、作用時(shí)間、給藥方式及預(yù)處理?xiàng)l件的MLT干預(yù)下各指標(biāo)的變化，評(píng)價(jià)MLT的線粒體保護(hù)和抗凋亡作用（采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析）。 結(jié)果: 模型中RPE細(xì)胞隨H2O2劑量增加和作用時(shí)間延長，ROS產(chǎn)

4、生增加，并以線粒體為其主要產(chǎn)生部位；mtDNA整體完整性下降，出現(xiàn)大片段丟失；線粒體Cytochrome C釋放增加；細(xì)胞及其線粒體形態(tài)發(fā)生趨向于凋亡的改變；并且RPE細(xì)胞凋亡發(fā)生比例逐漸提高。一定條件（劑量、作用時(shí)間、給藥方式及預(yù)處理）的MLT干預(yù)能有效減少ROS產(chǎn)生，減輕mtDNA損傷，減少Cytochrome C釋放，細(xì)胞及線粒體形態(tài)趨于正?；煌瑫r(shí)RPE細(xì)胞凋亡比例顯著下降。 結(jié)論: 體外RPE細(xì)胞線粒體在H2