核因子-κB對偏頭痛患者血清培養(yǎng)正常人單核細(xì)胞株表達(dá)細(xì)胞因子TNF-α、IL-17的影響.pdf

1、偏頭痛是臨床上常見的非器質(zhì)性頭痛，目前其發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚。在諸多學(xué)說中，腦干-三叉神經(jīng)-血管炎性學(xué)說越來越受到廣泛關(guān)注，認(rèn)為偏頭痛的主要病理改變是腦膜血管擴(kuò)張和炎癥反應(yīng)，包括許多炎性細(xì)胞因子的異常都與其有關(guān)，如白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10等及白三烯、腫瘤壞死因子（TNF）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、C反應(yīng)蛋白和抗心磷脂抗體等。 有研究表明，IL-17可激活誘導(dǎo)型一氧化氮合

2、成酶（iNOS）高表達(dá)，使細(xì)胞產(chǎn)生NO、IL-1、TNF及MCP-1，而NO、TNF及IL-1與偏頭痛的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。因此，推測IL-17可能參與了偏頭痛的發(fā)生發(fā)展。而IL-17是否與偏頭痛有關(guān)呢？目前尚未見報道。 作為在炎性反應(yīng)中起關(guān)鍵作用的快反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB（Nuclearfactor-kappaB，NF-κB），在偏頭痛發(fā)作過程中的作用在硝酸甘油誘導(dǎo)的偏頭痛動物實驗中已得到了證明，而在偏頭痛患者發(fā)生發(fā)展過

3、程中的作用及與細(xì)胞因子TNF-α，IL-17之間的關(guān)系如何目前國內(nèi)外尚無報道。 目的: 本研究擬在體外細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)上，研究偏頭痛患者血清培養(yǎng)細(xì)胞后，細(xì)胞上清液中所產(chǎn)生的細(xì)胞因子TNF-α、IL-17的含量，以及應(yīng)用NF-κB抑制劑BAY11-7082后TNF-α、IL-17的含量變化，以進(jìn)一步探討TNF-α、IL-17、NF-κB在偏頭痛的發(fā)生發(fā)展中的關(guān)系，為臨床治療偏頭痛提供理論依據(jù)。 方法: 選取符合

4、國際診斷標(biāo)準(zhǔn)的偏頭痛患者40例，及正常對照組40例，采取單側(cè)頸靜脈血，不抗凝，低溫離心后取上層血清，置于-70℃冰箱保存待測。 采用人單核細(xì)胞株THP-1替代人外周血單核細(xì)胞進(jìn)行實驗。THP-1采用10％胎牛血清、RPMI1640培養(yǎng)基（含青霉素100U/ml，鏈霉素100ug/ml）進(jìn)行培養(yǎng)，置細(xì)胞于37℃的CO2孵育箱內(nèi)，通以95％O2和5％CO2混合氣體。使細(xì)胞密度維持在5×106～1×107/ml。用0.4％苔盼藍(lán)拒染試

5、驗檢測細(xì)胞活率，證實99％以上為活細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞總數(shù)達(dá)到實驗所需數(shù)量時，換用無血清RPMI1640維持液培養(yǎng)24h，使細(xì)胞同步化。將THP-1隨機(jī)分成偏頭痛血清組、偏頭痛血清+NF-κB抑制劑BAY11-7082組及正常血清對照組。各組應(yīng)用48孔培養(yǎng)板中的40孔，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/ml/孔。培養(yǎng)24h后，分別收集細(xì)胞上清液，離心分裝后采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定上清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1

6、7（IL-17）的含量。以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線，將各組測定的TNF-α及IL-17的OD值換算出相應(yīng)濃度，并進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。 結(jié)果: （1）偏頭痛組血清培養(yǎng)THP-124h后，細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-17含量均較正常血清對照組升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）。 （2）偏頭痛血清+BAY11-7082培養(yǎng)的THP-1細(xì)胞上清液中TNF-α含

7、量顯著低于偏頭痛血清組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而和正常血清組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 （3）偏頭痛血清+BAY11-7082培養(yǎng)的THP-1細(xì)胞上清液中IL-17含量低于偏頭痛血清組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而仍高于正常血清組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 （4）相關(guān)性分析顯示：偏頭痛血清組中TNF-α與IL-17呈正相關(guān)（r=0.906，P<0.01）；偏頭痛血清+NF-κB抑制劑BAY1