細(xì)胞因子TNF-α誘導(dǎo)的HepG2肝癌細(xì)胞及HL-7702正常人肝細(xì)胞的microRNA表達(dá)譜差異分析.pdf

1、近年來，miRNA(microRNA)被報道與一些致癌過程有關(guān)，其機(jī)制可能是充當(dāng)了腫瘤抑癌基因或癌基因的功能，能調(diào)節(jié)在人類癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用的靶標(biāo)基因的表達(dá)。新一代高通量測序技術(shù)是繼高通量芯片檢測技術(shù)之后對基因表達(dá)差異進(jìn)行分析的最為高效、準(zhǔn)確的技術(shù)平臺之一，該技術(shù)在miRNA表達(dá)譜分析中已經(jīng)得到越來越廣泛的應(yīng)用。本論文利用新一代高通量測序平臺SOLiD4.0系統(tǒng)對兩種細(xì)胞系（HepG2肝癌細(xì)胞和HL-7702正常肝細(xì)胞）在TN

2、F-α誘導(dǎo)前后分別進(jìn)行了miRNA表達(dá)譜檢測和差異分析，主要研究內(nèi)容分以下幾部分:
　　 1、利用新一代高通量測序技術(shù)及相關(guān)生物信息學(xué)方法研究了HepG2肝癌細(xì)胞及正常人肝細(xì)胞的miRNA表達(dá)譜差異。表達(dá)譜比對分析中發(fā)現(xiàn)，HepG2肝癌細(xì)胞中21個miRNA表達(dá)顯著上調(diào):hsa-miR-105、hsa-miR-199a-3p、hsa-miR-199b-3p、hsa-miR-320d、hsa-miR-767-5p、hsa-miR-

3、99b*、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-877等;18個miRNA的表達(dá)顯著下調(diào):hsa-miR-126、hsa-miR-203、hsa-miR-365、hsa-miR-577、hsa-miR-664等。隨后結(jié)合功能注釋的結(jié)果和已有的研究報道，對以上miRNA在肝癌及相關(guān)癌細(xì)胞中的生長和凋亡調(diào)控中的作用進(jìn)行了系統(tǒng)的討論。
　　 2、利用新一代高通量測序技術(shù)及相關(guān)生物信息學(xué)方法研究了經(jīng)過TNF-α在不同處理時間（0

4、.5h和1.5h）誘導(dǎo)的HepG2肝癌細(xì)胞(H)及正常人肝細(xì)胞HL-7702(L)的miRNA表達(dá)譜，并建立了四組比對體系L-0.5/L-negative、L-1.5/L-negative、H-0.5/H-negative和H-1.5/H-negative，分別找出了HepG2人類肝癌細(xì)胞株和HL-7702人正常肝細(xì)胞株在不同的TNF-α誘導(dǎo)時間情況下異常表達(dá)顯著的miRNA，并通過功能注釋對其功能進(jìn)行了探討。研究發(fā)現(xiàn)，HepG2細(xì)胞受

5、TNF處理后，得到較多的miRNA表達(dá)異常，其中大部分為表達(dá)顯著下調(diào)，下調(diào)miRNA中發(fā)現(xiàn)若干癌癥相關(guān)的miRNA，推測TNF-α具有抑制具有癌基因功能的miRNA的致癌機(jī)制，從而誘導(dǎo)癌細(xì)胞進(jìn)行凋亡。而正常人肝細(xì)胞受TNF-α處理后，miRNA表達(dá)差異顯著的miRNA較少，其中多為上調(diào)。TNF-α對非癌細(xì)胞的作用并不明顯。
　　 3、在TNF-α誘導(dǎo)的HepG2和正常人肝細(xì)胞的miRNA表達(dá)譜分析的基礎(chǔ)上，嘗試對人類基因組范圍內(nèi)

6、miRNA和Rel/NF-κB家族分子相互調(diào)控關(guān)系的探索。研究建立了miRNA和Rel/NF-κB家族分子相互調(diào)控的模型，使用靶基因預(yù)測和blast比對搜索相結(jié)合的方式進(jìn)行檢索。預(yù)測了2個miRNA-Rel/NF-κB反饋調(diào)控關(guān)系，即NFKBIAhsa-mir-196b/Rel/NF-κB和hsa-mir-219-1/Rel/NF-κB。這種對于全基因組范圍內(nèi)miRNA和NF-κB家族因子相互作用關(guān)系的搜索只是一個初步的探索，其結(jié)果還需