葛根素對頸上和星狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X-,3-受體介導(dǎo)心肌缺血引發(fā)交感反射的作用研究.pdf

1、背景和目的：心肌缺血可通過感覺神經(jīng)的傳入信息影響頸部交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的功能，進而加強交感節(jié)后神經(jīng)元活動，引起血壓升高和心率加快等交感興奮性反射。心肌缺血產(chǎn)生ATP與嘌呤能受體在傷害性感覺傳遞中起重要作用。嘌呤能受體中P2X3受體選擇性在傷害性感覺神經(jīng)元高表達(dá)。支配心臟的頸上和星狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中有P2X3受體表達(dá)。我們實驗室的研究顯示ATP通過激活心臟傳入神經(jīng)通路中的頸上交感神經(jīng)節(jié)(SCG)、星狀交感神經(jīng)節(jié)(SG)細(xì)胞的P2X3受體參與了心肌

2、缺血傷害性信息的傳遞。葛根素為豆科植物葛根中提取的一種異黃酮類化合物，具有擴張冠脈和腦血管、降低心肌耗氧量、改善心肌收縮功能、促進血液循環(huán)、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)細(xì)胞的保護等作用。我們實驗室前期研究表明葛根素可抑制背根神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X3受體激動劑激活的電流，減少或抑制傷害性感覺信息的傳遞。但葛根素對頸部交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X3受體介導(dǎo)心肌缺血引發(fā)交感反射是否產(chǎn)生作用，目前尚無文獻報道。本實驗擬通過觀察葛根素處理心肌缺血前后頸上、星

3、狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的P2X3受體和酪氨酸羥化酶(TH)表達(dá)的變化，探討葛根素對頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X3受體介導(dǎo)的心肌缺血傷害性信息引發(fā)交感反射的影響，這將有助于人們進一步了解葛根素在心肌缺血治療中的作用及其可能作用靶點，并為其防治冠心病心肌缺血、心肌梗死提供新的實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)建立心肌缺血大鼠模型，心電圖、心肌HE染色觀察葛根素對心肌缺血損傷的作用；
　　 (2)無創(chuàng)法血壓計檢測心肌缺

4、血模型組、葛根素干預(yù)的心肌缺血模型組大鼠的血壓、心率及呼吸變化，并與葛根素對照組和生理鹽水對照組比較；
　　 (3)免疫熒光雙標(biāo)觀察各組大鼠SCG、SG細(xì)胞和心肌P2X3和TH共表達(dá)的變化；
　　 (4)免疫組化方法和蛋白印跡技術(shù)了解葛根素對心肌缺血大鼠SCG細(xì)胞和SG細(xì)胞P2X3受體蛋白表達(dá)的影響；
　　 (5)原位雜交的方法觀察葛根素干預(yù)后SCG細(xì)胞和SG細(xì)胞P2X3受體mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)

5、果：
　　 (1)心肌缺血損傷的大鼠模型的心電圖出現(xiàn)病理性Q波，ST段移位。心肌HE染色顯示心肌缺血模型組心肌呈現(xiàn)大面積心肌纖維化和心肌細(xì)胞萎縮現(xiàn)象，葛根素干預(yù)后可以改善心肌缺血大鼠心電圖異常變化和心肌損傷。
　　 (2)心肌缺血模型大鼠收縮壓(73．35±2．51mmHg)，心率(445．67±16．58次/分)和呼吸(92．33±5．78次/分)與對照組大鼠收縮壓(69．13±0．55mmHg)、心率(366．17±

6、8．44次/分)和呼吸(72．83±2．63次/分)相比增加(n=6)(p<0．05)。葛根素干預(yù)組大鼠收縮壓(69．85±1．61 mmHg)、心率(374．00±6．89次/分)和呼吸(76．33±2．16次/分)較心肌缺血組大鼠降低(n=6)(p<0．05)。對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05)。
　　 (3)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示在大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌組織P2X3受體和TH共表達(dá)，心肌缺血組高于對

7、照組，葛根素干預(yù)心肌缺血后，共表達(dá)下降。
　　 (4)免疫組化結(jié)果顯示頸上神經(jīng)節(jié)P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對照組，葛根素對照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．10±0．03(n=10)，0．08±0．01(n=10)，0．15±0．03(n=10)，0．07±0．04(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=11．285)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對照組增加

8、(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=1．292)。星狀神經(jīng)節(jié)P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對照組，葛根素對照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．16±0．02(n=10)，0．15±0．01(n=10)，0．20±0．02(n=10)，0．15±0．01(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對照組和葛根素

9、干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=9．544)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=0．895)。
　　 (5)原位雜交結(jié)果顯示頸上神經(jīng)節(jié)P2X3 mRNA表達(dá)的光密度值在生理鹽水對照組，葛根素對照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．13±0．02(n=10)，0．1

10、2±0．01(n=10)，0．23±0．03(n=10)，0．12±0．01(n=10)。心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)高于對照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=42．589)，心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)較對照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3 mRNA表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=1．253)。星狀神經(jīng)節(jié)P2X3 mRN

11、A表達(dá)的光密度值在生理鹽水對照組，葛根素對照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．08±0．01(n=10)，0．09±0．01(n=10)，0．12±0．02(n=10)，0．09±0．02(n=10)。心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)高于對照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=11．345)，心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)較對照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0

12、．05)；對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=0．906)。
　　 (6)蛋白印跡結(jié)果經(jīng)β-actin標(biāo)化后顯示在SCG細(xì)胞P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對照組，葛根素對照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．97±0．02(n=10)，0．98±0．04(n=10)，1．15±0．04(n=10)，0．99±0．03(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01

13、；F(3，36)=52．418)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=0．552)。在SG細(xì)胞P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對照組，葛根素對照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．99±0．02(n=10)，0．98±0．02(n=10)，1．11±0．05(n=10)，0．9

14、9±0．03(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對照組和葛根素干預(yù)組(P<0．01；F(3，36)=26．192)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對照組和葛根素干預(yù)組無顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=1．043)。
　　 結(jié)論：葛根素可以降低心肌缺血大鼠SCG和SG神經(jīng)細(xì)胞及心肌交感神經(jīng)P2X3受體表達(dá)，從而使心