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文檔簡介
1、目的:探討人類原發(fā)性膽囊癌的發(fā)生是否與幽門螺桿菌(Helicobacter pylor,Hp)的感染有關,為原發(fā)性膽囊癌的治療提供新的思路。
方法:采用病例對照研究,選取18例原發(fā)性膽囊癌(primary carcinoma of the gallbladder,PCG)和40例慢性膽囊炎、膽結石(chronic cholecystitis or cholelithiasis,CC)患者的血清標本以及手術后的膽囊粘膜、膽汁
2、標本進行Hp檢測,選取20例排除PCG和CC的患者作為對照。采用ELISA方法檢測各組血清中Hp IgG的存在;利用微氧培養(yǎng)基從新鮮膽囊粘膜和膽汁標本培養(yǎng)螺桿菌;DNAzol提取膽囊粘膜和膽汁中的DNA,采用巢式聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)方法擴增螺桿菌特異的16S rRNA基因;對PCG組螺桿菌16S rRNA基因陽性的樣品檢測Hp特異26KDa蛋白基因和4個相關功能基因(cagA、va
3、cA、rps4、ureA),并進行測序分析,確定檢出的細菌是否為Hp;westerblot檢測Hp相關功能蛋白UreA、UreB、VacA和CagA,初步探討Hp感染導致PCG發(fā)生的機制。
結果:⑴術前一天,PCG組中,18份血清標本中有16份顯示為Hp IgG陽性,陽性率為88%;CC組中,40份血清標本有25份顯示為Hp IgG陽性,陽性率為63%;對照組中,20份血清標本有7份顯示為Hp IgG陽性,陽性率為35%;
4、PCG組中Hp IgG陽性率明顯高于CC組和對照組。術后,Hp IgG陽性率逐漸下降,術后一年,三組Hp IgG陽性率差異無統(tǒng)計學意義。⑵PCG、CC和對照組患者新鮮膽囊粘膜或膽汁標本中均未能培養(yǎng)出螺桿菌。⑶PCG組中,36份膽囊粘膜和膽汁標本有29份檢出螺桿菌屬特異性16S rRNA基因,陽性率為81%;CC組中,80份膽囊粘膜和膽汁標本有40份檢出16S rRNA基因,陽性率為50%;對照組中,40份膽囊粘膜和膽汁標本有8份檢出16
5、S rRNA基因,陽性率為20%;其中PCG組16S rRNA基因檢出率明顯高于CC組和對照組,CC組螺桿菌基因檢出率顯著高于對照組。⑷29份螺桿菌16S rRNA基因陽性的膽囊粘膜或膽汁標本中,15份cagA基因陽性,陽性率為52%;25份26KDa基因陽性,陽性率為86%;14份ureA基因陽性,陽性率為48%;vacA基因和rps4基因陽性率均為零。27份標本cagA、26KDa、vacA、ureA和rps4基因至少一項陽性,陽性
6、率為93%。⑸29份螺桿菌16S rRNA基因陽性的膽囊粘膜或膽汁標本經測序鑒定,與Hp有99%以上的同源性。⑹PCG組中,UreA、UreB、VacA和CagA蛋白陽性率分別為39%、11%、6%和42%;CC組中,UreA、UreB、VacA和CagA蛋白陽性率分別為24%、11%、8%和29%;對照組中,UreA、UreB、VacA和CagA蛋白陽性率分別為7%、10%、5%和10%;PCG組CagA和UreA蛋白的陽性率及平均光
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