EGFr-T790M突變所致吉非替尼耐藥肺腺癌細(xì)胞化療藥物敏感性變化的研究.pdf

1、研究背景：
　　近年來靶向治療成為NSCLC治療的重要手段，但是用藥一段時間后都不可避免的產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥。目前對NSCLC靶向治療繼發(fā)性耐藥后的治療尚無統(tǒng)一定論，改行化療仍是其有效的治療方法之一。如何選擇對靶向治療耐藥NSCLC敏感的化療藥物具有重要的臨床意義，值得深入研究。
　　本實(shí)驗(yàn)檢測肺腺癌細(xì)胞株P(guān)C-9及PC-9/GR，對順鉑、吉西他濱、長春瑞濱、紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞的敏感性，以及兩個細(xì)胞株ERCC1、RRM

2、1、TUBB3、TS基因mRNA及蛋白的表達(dá)情況。為臨床EGFR-T790M突變導(dǎo)致EGFR-TKI繼發(fā)性耐藥患者后續(xù)化療藥物的選擇提供臨床前依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1、將PC9細(xì)胞培養(yǎng)于含有10％胎牛血清的1640完全培養(yǎng)基，PC9/GR細(xì)胞培養(yǎng)于含濃度為10mmol/L的吉非替尼及10％胎牛血清的1640完全培養(yǎng)基，并置于37℃、5％CO2、濕度為80％的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2、應(yīng)用MTT法檢測PC9及PC9

3、/GR細(xì)胞對順鉑、吉西他濱、長春瑞濱、紫杉醇、多西紫杉醇、培美曲塞的IC50。
　　3、分別利用液相芯片法和Western-Blot法，檢測PC9及PC9/GR細(xì)胞ERCC1、RRM1、TUBB3、TS基因mRNA及蛋白的表達(dá)水平。
　　4、采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、MTT方法檢測結(jié)果，與PC9細(xì)胞比較，PC9/GR細(xì)胞對順鉑、吉西他濱、培美

4、曲塞的IC50值明顯增高(P＜0.05)，對長春瑞濱、紫杉醇、多西紫杉醇IC50值明顯降低(P＜0.05)。
　　2、液相芯片方法檢測PC9/GR細(xì)胞較PC9細(xì)胞ERCC1、TS、RRM1 mRNA的表達(dá)量明顯升高(P＜0.05)，TUBB3 mRNA的表達(dá)量明顯降低(P＜0.05)。
　　3、Western-Blot方法檢測PC9/GR細(xì)胞較PC9細(xì)胞ERCC1、TUBB3、TS、RRM1蛋白的表達(dá)量明顯升高(P＜0.05