Vγ9Vδ2T細(xì)胞在結(jié)核性胸腔積液中的分布及功能研究.pdf

1、目的：通過分別觀察Vγ9Vδ2T細(xì)胞在結(jié)核性胸腔積液患者、治療后、健康人群中的表達(dá)情況，同時檢測外周血和胸腔積液中的Vγ9Vδ2T細(xì)胞在體外實驗中，對于不同刺激物如PMA、HMBPP與PPD刺激時，Vγ9Vδ2T產(chǎn)生細(xì)胞因子的效應(yīng)。初步探索Vγ9Vδ2T細(xì)胞在結(jié)核病發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)和作用，探討肺結(jié)核患者體內(nèi)Vγ9Vδ2T細(xì)胞的變化與臨床轉(zhuǎn)歸之間的相關(guān)性，將會為結(jié)核病的檢測及獲得有效的免疫治療方法開辟新的思路。
　　 方法：22例

2、結(jié)核性胸腔積液患者（包括8例結(jié)核治療后病例），6例健康人分別作為結(jié)核組，對照組。結(jié)核患者于入院當(dāng)天，治療后于1月-3月門診隨訪時，在清晨取實驗對象外周血5-10ml，采用EDTA抗凝管保存，采用密度梯度離心法從EDTA抗凝的外周血液樣本分離出外周血單個核細(xì)胞(PBMC);胸腔積液沉淀細(xì)胞標(biāo)本采用胸腔穿刺抽液術(shù)或閉式胸腔引流術(shù)留取胸腔積液標(biāo)本20-50ml，均于采集當(dāng)日密度梯度離心法分離，即刻進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。計數(shù)完成后將細(xì)胞分為兩部分:一部

3、分直接用于流式染色檢測Vγ9Vδ2T細(xì)胞數(shù)量;另一部分10％胎牛血清-RPMI1640（10％FCS-RPMI1640）重懸后分別設(shè)置為對照組、PMA/Ionomycin組、HMBPP組、PPD組，分別加入相應(yīng)刺激物后，放置于5％CO2恒溫培養(yǎng)箱孵育1小時后，在加入高爾基阻斷劑孵育5小時，隨后取出細(xì)胞進(jìn)行流式染色。除了對Vγ9Vδ2T細(xì)胞表型的檢測外還要對其進(jìn)行破膜、固定，以便對胞內(nèi)細(xì)胞因子IL-22/IFN-γ表達(dá)進(jìn)行檢測。所有指標(biāo)均

4、使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果：⑴結(jié)核患者，其外周血Vγ9Vδ2T細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞百分比在結(jié)核治療后有明顯增加，相對于正常人外周血偏低;結(jié)核患者，其胸腔積液中Vγ9Vδ2T細(xì)胞比例高于外周血中，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。⑵對于結(jié)核患者來說，其外周血中IL-22+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在PMA刺激下明顯多于HMBPP組，PPD刺激下明顯多于HMBPP組，患者外周血的IFN-γ+Vγ9Vδ2T

5、細(xì)胞在PMA，HMBPP刺激下均明顯增多，PMA，HMBPP組，PPD組依次減少，患者外周血Vγ9Vδ2T細(xì)胞在空白組，PPD組IL-22+Vγ9Vδ2T細(xì)胞多于IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞。其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。⑶結(jié)核治療一月后其外周血IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在PMA，HMBPP刺激下均明顯增多，PMA，HMBPP組，PPD組依次減少，IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在PMA，HMBPP組多于其相應(yīng)的IL-22+

6、Vγ9Vδ2T細(xì)胞，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。⑷健康人對照組外周血IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在PMA，HMBPP刺激下均明顯增多，PMA，HMBPP組，PPD組依次減少，IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在PMA，HMBPP組多于其相應(yīng)的IL-22+Vγ9Vδ2T細(xì)胞，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。⑸結(jié)核患者其外周血相對于結(jié)核治療一月后和健康人，IL-22+Vγ9Vδ2T細(xì)胞明顯增多，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.0

7、5)。⑹結(jié)核患者其外周血相對于健康人IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在PMA組明顯減少，結(jié)核患者治療后外周血相對于健康人群產(chǎn)生IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在HMBPP組明顯減少，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。⑺結(jié)核患者胸腔積液標(biāo)本中IFN-γ+Vγ9Vδ2T細(xì)胞在各種刺激條件下PMA/HMBPP/PPD組多于其相應(yīng)的分泌IL-22+Vγ9Vδ2T細(xì)胞，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。⑻結(jié)核性胸腔積液患者外周血IFN-γ+V