eNOS基因表達(dá)對(duì)大鼠動(dòng)脈硬化模型的評(píng)價(jià).pdf

1、動(dòng)脈硬化閉塞癥(Arteriosclerosis obliterans，ASO)的發(fā)病率現(xiàn)以驚人的速度呈逐年增高趨勢(shì)，已居下肢缺血性疾病的首位。而動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)是血管系統(tǒng)疾病的主要病理基礎(chǔ)，動(dòng)脈硬化會(huì)引起動(dòng)脈壁增厚、變硬、失去彈性，最終可導(dǎo)致管腔狹窄、閉塞。若不加重視，輕者肢體出現(xiàn)發(fā)涼、麻木、疼痛，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量，重者可致肢體壞疽，需截肢甚至導(dǎo)致病人死亡。由于動(dòng)脈硬化閉塞癥(ASO)的發(fā)病機(jī)

2、制還不明確，所以建立動(dòng)脈硬化閉塞癥(ASO)的病理動(dòng)物模型，對(duì)于探明ASO的病因、病理生理、發(fā)病機(jī)制及防治藥物的研究與開(kāi)發(fā)均具有重要的意義。 血管內(nèi)皮可以分泌有自身調(diào)節(jié)作用的調(diào)節(jié)分子，一氧化氮(NO)就是其中之一。一氧化氮(nitric oxide，NO)在心血管系統(tǒng)具有維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓，抑制血管平滑肌細(xì)胞遷移、增生，抑制血小板聚集與白細(xì)胞對(duì)血管壁的黏附、調(diào)節(jié)影響心肌收縮與舒張功能的作用，并在影響心率變異性與心臟重塑調(diào)節(jié)方

3、面起重要作用。作為決定NO生成的酶，一氧化氮合成酶(NOS)在體內(nèi)廣泛分布，其中以?xún)?nèi)皮性一氧化氮合酶最為重要。因此，本研究首先在大鼠股—腘動(dòng)脈內(nèi)注入蒸餾水，通過(guò)低滲造成動(dòng)脈內(nèi)膜非機(jī)械性、淺表性損傷，再以高脂、高膽固醇等飼料喂飼的方法，建立大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型。然后應(yīng)用熒光定量PCR的方法檢測(cè)了eNOS基因在大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型股—腘動(dòng)脈中的表達(dá)，為進(jìn)一步揭示人類(lèi)動(dòng)脈硬化閉塞癥的發(fā)病機(jī)制和尋找基因治療的新靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。 材料與方法

4、: 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康純種Wistar雄性大白鼠70只，體重200g(3—4月齡)。 高脂飼料：62.8％基礎(chǔ)飼料+20％豬油+15％膽固醇+2％膽酸鈉+0.2％丙基硫氧嘧啶+維生素D3 1、構(gòu)建大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型 暴露大鼠股—腘動(dòng)脈，用小動(dòng)脈夾阻斷動(dòng)脈遠(yuǎn)近端共約1.5—2cm，以特制玻璃穿刺針刺入阻斷的動(dòng)脈內(nèi)并注入蒸餾水，5分鐘后取下針頭和動(dòng)脈夾，縫合皮膚。以高脂飼料喂養(yǎng)。

5、 2、大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型的鑒定 分別在術(shù)后15天，30天和90天剖取大鼠的股腘動(dòng)脈，HE染色和bFgf染色后光學(xué)顯微鏡下觀察，鑒定大鼠動(dòng)脈硬化閉塞的程度。 3、eNOS基因在大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型股腘動(dòng)脈中的表達(dá) 分別在術(shù)后15天，30天和90天剖取大鼠的股腘動(dòng)脈，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。SYBR—GREENⅠ染料法熒光定量PCR擴(kuò)增比較eNOS基因在大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型股腘動(dòng)脈中的表達(dá)。 結(jié)

6、果: 1、大鼠的手術(shù)順利完成 2、成功制作大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型 三個(gè)月后損傷+高脂組(D組)光鏡見(jiàn)典型的ASO病理改變；內(nèi)皮細(xì)胞脫落、內(nèi)彈力板破壞(中斷或消失)、結(jié)構(gòu)異常、內(nèi)膜肥厚、中膜平滑肌增生穿過(guò)內(nèi)彈力板向內(nèi)皮下遷移、結(jié)締組織增生排列紊亂，管腔狹窄、甚至血栓形成，斑塊內(nèi)可見(jiàn)泡沫細(xì)胞，部分可見(jiàn)壞死和鈣化灶形成。形成與人ASO相似的、較成熟的、實(shí)驗(yàn)周期短的大鼠動(dòng)脈硬化閉塞模型。 3、eNOS基因在大鼠動(dòng)脈

7、硬化閉塞模型股腘動(dòng)脈中的表達(dá) 熒光定量PCR結(jié)果表明eNOS在動(dòng)脈硬化閉塞模型大鼠股腘動(dòng)脈中的相對(duì)表達(dá)量分別為0.7219(術(shù)后15天)，0.6444(術(shù)后30天)，0.4601(術(shù)后90天)，以正常對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量為1.0000。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明eNOS在動(dòng)脈硬化閉塞模型大鼠股腘動(dòng)脈中表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論: 大鼠股—腘動(dòng)脈動(dòng)脈內(nèi)注入蒸餾水損傷內(nèi)皮+高脂、高膽固醇飼料喂養(yǎng)可形成大鼠動(dòng)脈硬化閉