人體食管組織中終隔細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及相關(guān)研究.pdf

1、終隔細(xì)胞(Telocytes，TCs)是一種新型的間質(zhì)細(xì)胞，典型的終隔細(xì)胞胞體較小，有著極長(zhǎng)的胞質(zhì)突起，稱為端支(telopodes，Tps)。研究發(fā)現(xiàn)哺乳類的多種器官和組織中均存在這類細(xì)胞，大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明此類細(xì)胞與組織、器官的運(yùn)動(dòng)、血供、免疫、損傷修復(fù)、組織再生等重要活動(dòng)相關(guān)。然而終隔細(xì)胞在人體中的相關(guān)研究并不完善。一些研究顯示終隔細(xì)胞存在于人心肌、人子宮及輸卵管、胎盤組織、泌尿道、骨骼肌、肺臟、乳腺及胰腺外分泌部。終隔細(xì)胞定位于

2、這些器官的結(jié)締組織內(nèi)，與其他特殊類型的細(xì)胞相互關(guān)聯(lián)，如內(nèi)皮細(xì)胞、肌纖維、神經(jīng)細(xì)胞終端、干細(xì)胞或免疫細(xì)胞。這些研究均以形態(tài)學(xué)層面的研究為主，終隔細(xì)胞在人體中的生理作用相對(duì)而言知之甚少，而對(duì)于食管、胸腺、皮膚等器官組織中終隔細(xì)胞的研究尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。那么在這些組織中是否存在終隔細(xì)胞，若存在，它的生理學(xué)作用是什么，有沒(méi)有參與某些疾病的調(diào)控?我們選取正常人食管組織為研究對(duì)象，利用透射電子顯微鏡技術(shù)及免疫組織化學(xué)方法從形態(tài)學(xué)的角度原位觀察終隔細(xì)胞是否

3、存在；同時(shí)利用原代細(xì)胞培養(yǎng)及活細(xì)胞染色技術(shù)分離并原代培養(yǎng)終隔細(xì)胞，以尋找以上問(wèn)題的解答。
　　 我們從接受手術(shù)的食管疾病患者切除的組織中獲得10份人食管標(biāo)本(已通過(guò)中山倫理委員會(huì)審核，患者知情同意書已簽署)，并經(jīng)高年資病理醫(yī)生確認(rèn)為正常食管組織。每份組織均分為3份：新鮮組織一份(約1mm3)用于透射電子顯微鏡(TEM)觀察；福爾馬林預(yù)制一份，用于HE切片染色及免疫組織化學(xué)法染色觀察；新鮮組織一份(無(wú)菌)用于原代終隔細(xì)胞分離，體外

4、培養(yǎng)。
　　 透射電子顯微鏡檢查。小塊的新鮮組織采取后立即投入4％戊二醛溶液，經(jīng)過(guò)固定、脫水、浸透、包埋、聚合等預(yù)處理后，利用超微切片機(jī)制備成50nm的薄片，透射電子顯微鏡下觀察并拍照。我們發(fā)現(xiàn)，在食管的肌層及粘膜層均存在典型的終隔細(xì)胞，形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為較小的胞體，延伸出2-3支十分長(zhǎng)而分叉的附屬物(端支，telopodes，Tps)。端支外觀呈串珠狀，由細(xì)絲狀的胞質(zhì)(podomers)及其上膨起的顆粒狀節(jié)段(podoms)組成。

5、同時(shí)我們觀察到這些終隔細(xì)胞與人食管中的巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及毛細(xì)血管關(guān)系密切，鄰近的終隔細(xì)胞之間尚見(jiàn)到多支端支蜷曲形成迷宮樣的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
　　 免疫組織化學(xué)法染色。福爾馬林預(yù)制人食管組織塊經(jīng)固定、包埋、切片等處理后，經(jīng)HE染色確認(rèn)為食管組織。進(jìn)一步經(jīng)c-kit、vimentin及cD34免疫組織化學(xué)法處理，光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)典型的終隔細(xì)胞，胞體及附屬的細(xì)長(zhǎng)端支均陽(yáng)性。
　　 原代終隔細(xì)胞分離，體外培養(yǎng)，相差顯微鏡觀察。

6、在無(wú)菌環(huán)境下獲取正常人食管標(biāo)本，經(jīng)粉碎、消化、離心、重懸等處理得到原代終隔細(xì)胞，并利用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行體外培養(yǎng)。體外培養(yǎng)第三天起，反轉(zhuǎn)相差顯微鏡下即可觀察到終隔細(xì)胞及其典型的長(zhǎng)而呈念珠狀的端支。通常4天左右可獲得純度較高的貼壁的原代終隔細(xì)胞。為了更清楚的顯示終隔細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，我們使用了幾種常見(jiàn)的細(xì)胞活體染色技術(shù)。亞甲藍(lán)及吉姆薩染色后，可見(jiàn)長(zhǎng)達(dá)數(shù)十微米的終隔細(xì)胞，其細(xì)長(zhǎng)的附屬端支類似一串玻璃小珠，從胞體發(fā)出的基部較粗，并逐漸變細(xì)。

7、這些特點(diǎn)與樹(shù)突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞或成肌纖維細(xì)胞明顯不同。健那綠是一種常見(jiàn)的親線粒體染色劑。健那綠染色后觀察到終隔細(xì)胞胞體及端支上的膨大部分(podoms)染色明顯。
　　 終隔細(xì)胞是一種存在于結(jié)締組織中的間質(zhì)細(xì)胞，與內(nèi)皮組織、肌纖維、神經(jīng)細(xì)胞、免疫細(xì)胞等關(guān)系密切。本研究證明了人食管肌層及粘膜組織中存在典型的終隔細(xì)胞，且與毛細(xì)血管、平滑肌纖維、巨噬細(xì)胞關(guān)系密切，同時(shí)觀察到終隔細(xì)胞之間通過(guò)端支形成迷宮樣的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。我們的試驗(yàn)沒(méi)有得到

8、其他學(xué)者關(guān)于終隔細(xì)胞功能的假說(shuō)的直接證據(jù)。但是基于以上形態(tài)學(xué)研究，我們觀察到終隔細(xì)胞與其他間質(zhì)細(xì)胞以及終隔細(xì)胞之間通過(guò)端支形成三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，因此除了對(duì)組織的機(jī)械支持，我們認(rèn)為終隔細(xì)胞對(duì)免疫作用、細(xì)胞間的信息傳遞及調(diào)節(jié)起一定作用?？紤]到其與毛細(xì)血管及肌細(xì)胞關(guān)系密切，終隔細(xì)胞在損傷修復(fù)、組織再生中也可能存在功用。一些與平滑肌功能、組織損傷修復(fù)作用相關(guān)的食管疾病，如賁門失遲緩癥、反流性食管炎以及食管癌等，其發(fā)生發(fā)展是否與終隔細(xì)胞功能障礙相