野生型肺炎鏈球菌溶血素的初步研究.pdf

1、肺炎鏈球菌溶血素(Pneumolysin)是肺炎鏈球菌產(chǎn)生的最主要毒素之一，是肺炎球菌產(chǎn)生的唯一能破壞宿主防御、補(bǔ)體和免疫應(yīng)答的毒力蛋白，在肺炎鏈球菌致病過程中發(fā)揮著重要作用。所有不同血清型肺炎鏈球菌的溶血素分子構(gòu)造或抗原性相似，相互之間有交叉免疫保護(hù)作用，因而成為肺炎鏈球菌疫苗的理想候選基因之一。
　　本項(xiàng)研究通過分子生物學(xué)手段，成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞，并對野生型Pneumolysin的表達(dá)誘導(dǎo)條件進(jìn)行了優(yōu)

2、化，確定了最終的誘導(dǎo)條件;純化過程聯(lián)合使用了Q650和CHT兩種柱層析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明純化方案可行，最終獲得了純度在高于95％的野生型Pneumolysin抗原;通過溶血試驗(yàn)和中和反應(yīng)證明了表達(dá)及純化過程中目標(biāo)蛋白的生物活性，并且確定了目標(biāo)蛋白在表達(dá)及純化過程中的溶血價(jià)，篩選出了最佳的血清濃度:表達(dá)及純化過程中目標(biāo)蛋白的溶血價(jià)均為27，血清的最佳稀釋倍數(shù)為26，用Lowry法確定了目標(biāo)蛋白的總濃度為7.6μg/ml，其毒性可以被突變型抗體